[发明专利]一种新的多肽——人FKBP蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人FKBP蛋白9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

免疫亲和素是一种在多种组织中表达的管家基因。亲环素(Cyps)和FK506结合蛋白(FKBP)是其中的两个亚家族。前者与CsA结合，后者与FK506或纳巴霉素结合。CsA,FK506，纳巴霉素均为免疫系统抑制剂，是有诊断价值的免疫抑制性前体药物。CsA和FK506可以选择抑制早期T-cell活化，导致早期基因的转录失败，而这些基因编码的细胞因子参与多种细胞的免疫反应。这种对于T-cell活化的抑制作用可以用在诊断上抑制同种异体移植排斥。它们可以与内生性胞内受体如免疫亲和素结合形成复合物。该复合物可作用于蛋白磷酸酶，钙调磷酸酶和钙离子。

免疫亲和素具有肽基脯氨酸顺反异构酶(PPIase)活性，PPIase催化蛋白底物中的肽基脯氨酸的顺式、反式间的转化。PPIase具有高度的序列保守性，是一类在多种细胞类型中存在，具有不同生理分工的多功能酶。在细胞水平上，PPIase在每种部位都存在，既有镶嵌在膜上的，也有游离存在的。PPIase调控蛋白的折叠，合并和通道开放(Ca2+)。免疫亲和素与FK506结合会导致自身PPIase酶活性丧失，因为后者包含一个称为“螺旋氨基化合物替代物”(twisted amide surrogate)的结构，该结构模拟蛋白底物顺-反式肽基脯氨酸键转化的中间状态。有些免疫亲和素与免疫抑制剂结合形成复合物对哺乳类细胞有毒。除了该酶的酶活位点是药物结合位点外，免疫亲和素的PPIase酶活性与免疫抑制性药物的作用是无关的。在没有免疫抑制性药物存在的情况下，PPIase的作用主要是与细胞中富含脯氨酸的蛋白作用。FKBP含有脯氨酸结合口袋区和异构酶活性位点，这些结构与芳香类位点平行。因此，在活性位点上与富含脯氨酸的蛋白结合将会使脯氨酸的异构更容易。它只是脯氨酸结合的方便检测。

FKBP只有和免疫抑制药物FK506结合后才具有免疫抑制作用，FK506本身并不具有该种免疫抑制活性，所以FK506与CsA只是一种前提药物，它们也只有和免疫亲和素FKBP和Cyps结合后才能够与钙调磷酸酶等结合。免疫抑制素在此具有分子胶水的作用，将FKBP和钙调磷酸酶结合在一起

FKBP家族有很多成员，真核细胞，原核细胞中都有。这些酶的分子量在12-63kDa之间，等电点既有酸性的也有碱性的。FKBP在细胞质，膜和T-cell核中都有存在。FKBP家族成员的疏水性差别很大。FKBP具有PPIase酶的，但是与Cyps相比底物差异性很大。且FKBP家族成员的生物学功能差异也很大。FKBP-12是钙调素的辅助因子，并与钙离子释放通道紧密结合，与钙离子的释放有关。FKBP-52是多功能FK506结合蛋白，可以与90-Kda的热休克蛋白结合，是胆固醇受体复合物的组成部分，但当与FK506结合形成复合物时并无免疫抑制活性。FKBP-25干涉宿主细胞的免疫系统。FKBP-25还可与DNA结合，这种能力并不因与FK506或纳巴霉素的结合而丧失。FKBP36在很多组织如肝，肾，骨骼肌等中表达，在Williams综合症中缺失。由于PPIase调控蛋白的折叠，合并和通道开放，而免疫亲和素与FK506结合会导致自身PPIase酶活性丧失，因此FKBP与FK506的异常结合会影响蛋白的三维结构而使蛋白的功能受到影响。如果这种情况发生在调控细胞周期或细胞信号传递的关键蛋白上，就有可能使细胞增殖失控而导致各种肿瘤的发生。

本发明的蛋白含有FKBP的特征性保守序列。通过基因芯片的表达谱分析发现，该基因在脑胶质瘤组织中的含量比在正常组织中低，说明其功能与癌症相关，以此认为本发明是一种新的人FKBP蛋白，具有类似的生物学功能，并命名为人FKBP蛋白9。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人FKBP蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人FKBP蛋白9。