[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白10和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人锌指蛋白10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

蛋白质含有锌指特征已知道参与多种有机体(酵母、果蝇、爪蟾、小鼠、人)的发育和正常细胞的生长和分化以及肿瘤的增殖。锌指模式的核酸束缚特性是由于它的第三位折叠和锌离子的四面体同等，折叠结构通过一些亲水的残基互相作用于核酸。

在植物中，大约有30个蛋白被报道含有或者一个、二个、三个或四个锌指。植物锌指蛋白特征是相邻的锌指之间有不同的间距和一个高度保守的序列。每个指定位一个假定的DNA接触表面，它们特异性识别目标DNA。一些真核和病毒蛋白含有保存的40-60残基半胱氨酸富集区，结合2个原子的锌，可能参与协调蛋白-蛋白互相作用，锌络合物系统的3D结构对环形区域来说是唯一的，在这样一个区域内半胱氨酸的间距是C3HC4排列。

许多锌指蛋白基因在不同物种中被视作生物重要性的基本特征，同源基因有共同的祖先和折叠，这是锌指蛋白特别的证据。

我们从人胎脑组织中克隆到的新基因，基因号0398H01，它包含的多核苷酸序列全长为3792bp，阅读框起始点121，中止位置813，编码了230个氨基酸，是一个锌指结构蛋白，它包含C3HC4区域，推测其可能是一个转录因子，通过一系列不同特异性的DNA识别和结合，参与调节基因的表达。研究思路是用这个基因的锌指区域作为探针去筛选一个人类真核基因库，鉴定其cDNA克隆，然后用RT-PCR方法去检测所属的细胞系，从而揭示它的功能。我们的这一个新基因所编码的锌指蛋白，具有结合2个锌原子的半胱氨酸富集区，从细胞生物学的角度来看，基本营养物象半胱氨酸、锌、铜和维他命C和E是维持最佳(免疫)细胞功能必不可少的，在进化发展中可利用的这些营养物的最佳分配一般可防止疾病，当然最根本还是依靠遗传和环境因素。正确数量的半胱氨酸、铜和锌离子在正确的地方在适当的时候以适当的方式被利用可防止AIDS病毒的繁殖，锌和铜离子抑制/阻碍激活基本蛋白分裂酶，象HIV蛋白酶，另一方面，通过锌指分子结构，锌离子直接或间接调控T细胞抗病毒活动，锌离子和铜离子通过半胱氨酸和谷胱甘肽保存有充足的数量是有效的AIDS病毒天然抑制物，因此能防止慢性病毒疾病的发展及最终导致艾滋病、自身免疫疾病、过敏或肿瘤。一种安全的相当便宜和可广泛使用的内服药象N-乙酰半胱氨酸能帮助补充额外的半胱氨酸，而抗HIV多肽T22，能作为半胱氨酸和锌支持或携带分子来阻碍HIV通过CD4受体进入细胞。综上所述，通过和包含C3HC4锌指蛋白家族的分析比较以及对我们这一个新基因的功能推测，认为这一个新基因在防止艾滋病、人类自身免疫疾病、过敏和抗肿瘤的药物开发方面具有极大的应用前景。

本发明的多肽被推断鉴定为一种新的人锌指蛋白。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人锌指蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人锌指蛋白10。

由于如上所述人锌指蛋白10蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人锌指蛋白10以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白10的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人锌指蛋白10的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人锌指蛋白10的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人锌指蛋白10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。