[发明专利]一种新的多肽——G-底物蛋白12.43和编码这种多肽的多核苷酸无效
申请号: | 00116317.5 | 申请日: | 2000-06-05 |
公开(公告)号: | CN1326952A | 公开(公告)日: | 2001-12-19 |
发明(设计)人: | 毛裕民;谢毅 | 申请(专利权)人: | 上海博德基因开发有限公司 |
主分类号: | C07K14/435 | 分类号: | C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 多肽 蛋白 12.43 编码 这种 多核苷酸 | ||
本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明描述了一种新的多肽——G-底物蛋白12.43,以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
经系统中,小脑在运动的调节过程中起着非常重要的作用(Ito,M.,1984;Thach,W.T.,1998)。小脑中存在一种G-底物蛋白,它是少数几个cGMP依赖的蛋白激酶(PKG)的优先底物之一(Nairn,A.C.,Hemmings,H.C.,Jr.&Greengard,P.,1985;Aitken,A.,Bilham,T.et al.,1981)。G-底物蛋白集中于小脑的Purkinje细胞中,并且比较靠近PKG(Qian,Y.,Chao,D.S.,Santillano,D.R et al.,1996),因此它属于PKG的下游组分,同时也参与小脑的LTD反应,人的G底物mRNA只发现在小脑中有表达。
将人的G-底物蛋白的基因重组体转入大肠杆菌中进行表达,得到的蛋白与兔子小脑的G-底物蛋白在序列结构上非常相似。更为重要的是,纯化的G-底物能够被cGMA依赖的蛋白激酶磷酸化,因此它是一个高效的蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂。G-底物蛋白含有两个磷酸化位点,即Thr68和Thr119。将人与兔的G-底物蛋白进行序列比较,发现其在磷酸化位点上是保守的,不仅如此,在其它区域上也显示了很高的保守性,充分表明了两者的同源性。
全长的G-底物cDNA克隆包含了一个1.7Kb的插入序列,一个3’末端的多聚A尾巴和一个短的5’非翻译区域。cDNA上含有三个mRNA扰动信号(ATTTA)(Shaw,G.&Kamen,R.,1986)和一个在开放阅读框终止密码子之后出现的多聚A信号(AATAAA)。在5’非翻译区也包含一个框内终止密码子。
全长的cDNA含有一个465Bp的开放阅读框,编码了一条共有155个氨基酸残基的蛋白,其中有64个带电荷的氨基酸以及36个基本氨基酸。人的G-底物蛋白多肽是亲水性的,并且还属于热稳定性蛋白。
人的G-底物蛋白定位于染色体7p15上,值得注意的是,另外也有一些与神经遗传性疾病相关的基因也位于该染色体上的附近位置。
通过基因芯片的分析发现,在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast,生长因子刺激,1024NT、疤痕成fc生长因子刺激,1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激,1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中,本发明的多肽的表达谱与G-底物蛋白的表达谱非常近似,因此二者功能也可能类似。本发明被命名为G-底物蛋白12.43。
由于如上所述G-底物蛋白12.43蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用,而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白,因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的G-底物蛋白12.43蛋白,特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新G-底物蛋白12.43蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础,因此分离其编码DNA是非常重要的。
本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——G-底物蛋白12.43以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。
本发明的另一个目的是提供含有编码G-底物蛋白12.43的多核苷酸的重组载体。
本发明的另一个目的是提供含有编码G-底物蛋白12.43的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。
本发明的另一个目的是提供生产G-底物蛋白12.43的方法。
本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——G-底物蛋白12.43的抗体。
本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——G-底物蛋白12.43的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。
本发明的另一个目的是提供诊断治疗与G-底物蛋白12.43异常相关的疾病的方法。
本发明涉及一种分离的多肽,该多肽是人源的,它包含:具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地,该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。
本发明还涉及一种分离的多核苷酸,它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体:
(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸;
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