[发明专利]一种新的多肽——人类Nedd－4泛醌蛋白连接酶WWP28.8和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

由35-40个氨基酸构成，其中含有四个极为保守的芳香族残基，有两个是色氨酸。WW域的二级结构由一个略为弯曲的三链反平行的beta片层构成。WW域存在于参与信号，调节，以及细胞骨架功能的各类蛋白中，它在信号机制中迅捷应急的功能与几种人类的疾病例如Liddle综合征有关。WW域具有不同的配体特异性，在介导特异且不同的蛋白与蛋白作用中直接起作用。人体内的Nedd-4蛋白中也存在有WW域，含WW域的蛋白被称为WWP，现发现有三类新的WWP：WWP1，WWP2，WWP3，其中共含有九种新的WW域。WWP1及WWP2都含有四个串联的WW域并与Nedd-4蛋白共享一个相似的模板域。WWP3含有一个单一的WW域。WWP2中的WW域核心的两侧有两块明显同源的区域，区域中包括在所有WW域中都绝对保守的N-端色氨酸及C-端脯氨酸残基。在所有的含WW域蛋白中，WWP2与Nedd-4非常相似，因而这两种蛋白中所含的WW域具有相似的功能，且同一蛋白的多个WW域并非多余，而是行使不同的特异性功能(Bork，P.，and Sudol，M.(1994)Trends Biochem.Sci.19，531-533)。

WWP2是与泛醌蛋白连接酶活性相关的人类-Nedd-4蛋白家族的新成员。WWP2中还含有300个氨基酸完整的C-端HECT(与E6-相关蛋白羧基端同源)域，该区域具有E3泛醌蛋白连接酶活性。HECT域的最后40个氨基酸中有一个保守的半胱氨酸残基，这是泛醌硫酯的形成位点。与E3泛醌蛋白连接酶相关的HECT域在确定泛醌降解系统的底物特异性中起重要作用。WWP2还编码一个代表包括蛋白激酶C以及突触结合蛋白(见于突触前小泡的钙结合蛋白)的一个大的蛋白家族的N-端类C2域。C2域与膜磷脂以钙依赖的方式结合，并在蛋白的胞内区室化作用中起作用。WWP2可作为E3泛醌蛋白连接酶作用，通过泛醌转移及蛋白酶解后的WW域底物蛋白作用进行最初的底物特异性识别。WWP2可用于治疗Liddle综合征等与泛醌蛋白连接酶活性相关的疾病(Pirozzi，G.，McConnell，S.J.，Uveges，A.J.，Carter，J.M.，Sparks，A.B.，J.Biol.Chem.272(23)，14611-14616(1997))。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP2的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8。

由于如上所述人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人类Nedd-4泛醌蛋白连接酶WWP28.8的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。