[发明专利]一种新的多肽——人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

个起始位点。这些位点由一些被多亚基复合物(ORC)识别的特定序列限定，ORC家族的所有成员对于细胞存活都是极为重要的。ORC以其复制前或复制后的形式与DNA的结合贯穿于细胞周期，并可作为一个补充其他参与复制机制的蛋白的平台起作用。CDC6/Cdc18蛋白是在起始DNA复制前由ORC补充的蛋白的一种。CDC6/Cdc18在序列上与ORC的一个亚基，ORC1紧密相关，这一相关区域上含有一个与核苷酸结合的特征序列模板。ORC利用AP与DNA结合并具有一种通过与DNA复制的起点结合而修饰的ATP酶活性。结合以及被真核生物起始蛋白水解的ATP是起始进程的一个重要的调节物(Bell，S.P.，and Stillman，B.(1992)Nature 357，128-134)。

人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)具有一个核苷酸三磷酸结合的特征序列模板，并与ORC1-Cdc18家族蛋白具有同源性。HsORC4mRNA的表达以及蛋白水平在细胞周期过程中维持不变。HsORC4L与人ORC的另一种亚基，HsORC2P是共免疫沉淀的，这与HsORC4L是人起始识别复合物的一部分是一致的(the Journal of Biological Chemistry，272(45)，28247-28251，(1997))。人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)缺失或发生突变将会影响ORC与DNA的结合以及对其他参与复制机制的蛋白的补充，从而引发一系列与之有关的癌症以及与不恰当的或不被调节的细胞增殖相关的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21。

由于如上所述人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人复制起始密码子起始识别复合物亚基Orc4Lp(HsORC4L)12.21异常相关的疾病的方法。