[发明专利]一种新的多肽——复制起始识别复合体亚基ORC413.64和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——复制起始识别复合体亚基ORC413.64，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

起始往往涉及到同时发生的许多位点上复制起始过程的控制。这些起始位点通常是一些特异性序列，能够被一种多亚基复合体——起始识别复合体(ORC)识别(Bell，S.P.，and Stillman，B.，1992；Diffley，J.F.，and cocker，J.H.，1992；Bell，S.P.，Kobayashi，R.et al.，1993)。所有的ORC复合体成员存在于细胞周期的所有阶段上，它们都是细胞正常生长和发育所必不可少的成分(Kobayashi，R.et al.，1993；Bell，S.P.，Mitchell，J.et al.，1995)。

在细胞周期过程中，ORC复合体在不论在前导复制还是在其后的复制形式中，都与DNA结合在一起(Bell，S.P.，and Stillman，B.，1992；Diffley，J.F.，and cocker，J.H.，1992)，并且还可以作为一些与DNA复制机制相关的蛋白发生聚集的平台。

ORC4的开放阅读框编码了一条长为436个氨基酸残基的蛋白，其大约的分子量为45KDa，它的起始因子Met前面还附加有一段含126个核苷酸的非翻译前导序列。ORC4氨基酸序的列第67—73位置上有一个NTP结合结构域，其序列结构为G-X-X-G-X-G-K-T(Koonin，E.V.，1993)。ORC4与Cdc18/ORC1家族密切相关，但是有一处明显的不同点，即ORC4并不包含有规范的核苷酸结合区域。而Cdc18和ORC1之间的共同点相对更加多一点。

实验表明，ORC4的mRNA水平在细胞周期的所有阶段上保持着基本的恒定，与之相同，ORC4蛋白的表达水平在整个细胞周期过程中也基本保持恒定不变。

ORC复合体结合到DNA上需要利用ATP，因此它具有ATP酶的活性(Bell，S.P.，and Stillman，B.，1992；Klemm，R.D.，Austin，R.J.et al.，1997)。这也表明，ATP被真核细胞起始蛋白的结合并且水解也是复制起始过程的一个重要步骤。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与复制起始识别复合体亚基ORC4的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为复制起始识别复合体亚基ORC413.64。

由于如上所述复制起始识别复合体亚基ORC413.64蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的复制起始识别复合体亚基ORC413.64蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新复制起始识别复合体亚基ORC413.64蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——复制起始识别复合体亚基ORC413.64以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码复制起始识别复合体亚基ORC413.64的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码复制起始识别复合体亚基ORC413.64的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产复制起始识别复合体亚基ORC413.64的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——复制起始识别复合体亚基ORC413.64的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——复制起始识别复合体亚基ORC413.64的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与复制起始识别复合体亚基ORC413.64异常相关的疾病的方法。