[发明专利]一种新的多肽——人L1元件类ORF2蛋白21和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人L1元件类ORF2蛋白21，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

主要的人类基因组由几段独特的DNA序列构成，这些序列中散布了许多含有重复序列的不同家族。这些散布的重复元件可根据它们的基因组长度分类。散布重复的短序列家族的成员，例如Alu重复被称为SINEs，而散布重复的长序列的家族成员则被称为LINEs。人类长的散布重复LINE-1(L1)构成了一个高度重复的DNA家族，该家族缺乏长的末端重复序列。有些L1元件能够在哺乳动物基因组中逆转录转座。L1序列的特征为一个在3’端富含A的片段，一个截短的5’端，以及显著的长的开放阅读框(ORFs)的延伸。完整的L1元件中一致的序列是6.5kb的长度并含有两个开放阅读框(ORF1以及ORF2)。ORF1编码一个40-kDa的蛋白，而ORF2具有一个序列上与逆转录酶一致的区域。两个开放阅读框区域的核苷酸序列以及两个开放阅读框的多肽链在所有的哺乳动物细胞中都是同源的。在许多实体瘤以及肿瘤细胞中都具有L1转录活性。已有研究证实有一个对人类L1转录十分重要的内部顺式元件以及一个与元件结合的核因子，这表明有些L1家族成员是编码一个或数个保守多肽的功能基因。L1转录的表达是相对人类特异的，而它在细胞中的转录功能对于增殖是关键性的(Dombroski，B.A.，Scott，A.F.，and Kazazian，H.H.，Jr.(1993)Proc Natl Acad.Sci.USA90，6513-6517)。

近来在小细胞肺癌中发现一个新的LINEl转录因子，该因子的核苷酸序列与一致完整的6.5kb L1中的开放阅读框2(ORF2)有98.4％的相似性，故而被称为L1元件类ORF2蛋白。该L1转录因子的表达是相对人类特异的，对于细胞增殖十分重要，该L1元件类ORF2蛋白的主要核苷酸序列与人成视网膜细胞瘤(Rb)，IL-2以及因子VIII基因中的序列有高度同源性。而Rb以及因子VIII基因在不同的癌症中具有高频率的染色体缺失，因而基因以及染色体中广泛地整合长的同源的L1元件将引起异常的DNA排列(Kou-Wha Kuo，Hamm-Ming Sheu，Yu-ShengHuang，Biochemical and Biophysical Research Communications 253，566-570(1998))。

本发明的新的人L1元件类ORF2蛋白与人L1元件类ORF2蛋白在蛋白水平上有64％的同一性和81％的相似性，且亦含有L1元件类ORF2蛋白家族其他成员所共有的各种特征序列片段，两者均为L1元件类ORF2蛋白家族的成员，且具有相似的生物学功能，故命名为人L1元件类ORF2蛋白21。该蛋白对于细胞增殖十分重要，其表达异常通常将导致异常的DNA排列，引发各种癌症，例如成视网膜细胞瘤(Rb)，小细胞肺癌等疾病。

由于如上所述人L1元件类ORF2蛋白21蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人L1元件类ORF2蛋白21蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人L1元件类ORF2蛋白21蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人L1元件类ORF2蛋白21以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人L1元件类ORF2蛋白21的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人L1元件类ORF2蛋白21的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人L1元件类ORF2蛋白21的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人L1元件类ORF2蛋白21的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人L1元件类ORF2蛋白21的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人L1元件类ORF2蛋白21异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。