[发明专利]一种新的多肽——H1yD蛋白家族分泌蛋白11和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——HlyD蛋白家族分泌蛋白11，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

革兰氏阴性茵能产生大量不需要N末端信号序列却能分泌进生长介质的分泌蛋白。这些蛋白有不同的功能，在通过细菌细胞外膜的分泌活动过程中需要两种或更多的蛋白质的帮助。这两种蛋白质中的一种属于ABC转运蛋白家族，另一种则属于HlyD蛋白家族。HlyD蛋白家族中的蛋白质成员在进化上是相关的，由390-480个氨基酸残基组成。它们可能通过N末端转膜区域锚定在内膜上。HlyD蛋白家族成员有许多膜移位酶，它们能以依赖pmf的方式从细胞中泵出溴化乙锭和其他药物，表明这些膜移位酶是一类药/氢离子antiporter。HlyD蛋白家族成员通常有一个不寻常的含有14个α转角的跨膜拓扑异构结构。该拓扑结构特征如下：一个短的N末端细胞质结构域，一个单独的转膜α转角和一个大的细胞质膜机构于。这些蛋白的功能是在内外膜之间形成一个连续的通道。蛋白的结合位点可能藏在膜的疏水性核心后，这样就可以自然地从细胞质的亲水性代谢产物中分拣出药物来。

该家族蛋白的C末端分泌部分是非常保守的区域，该保守区域的特征模式是：[LIVM]-x(2)-G-[LM]-x(3)-[STGAV]-x-[LIVMT]-x-[LIVMT]-[GE]-x-[KR]-x-[LIVMFYW](2)-x-[LI VMFYW](3)。

由于如上所述HlyD蛋白家族分泌蛋白11蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的HlyD蛋白家族分泌蛋白11蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新HlyD蛋白家族分泌蛋白11蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——HlyD蛋白家族分泌蛋白11以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码HlyD蛋白家族分泌蛋白11的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码HlyD蛋白家族分泌蛋白11的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产HlyD蛋白家族分泌蛋白11的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——HlyD蛋白家族分泌蛋白11的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——HlyD蛋白家族分泌蛋白11的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与HlyD蛋白家族分泌蛋白11异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中828-1133位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1468位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制HlyD蛋白家族分泌蛋白11蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与HlyD蛋白家族分泌蛋白11蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。