[发明专利]一种新的多肽——人非整合蛋白－金属蛋白酶11.11和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

白酶参与胞外蛋白代谢并可分为两大功能家族。基质降解的金属蛋白酶(胶原酶，明胶酶以及溶基质素)作为潜伏前形式被分泌入胞外空间，在那里被限制性蛋白酶解激活。基质活性被紧密控制在合成水平，通常是较低的并由细胞因子与其他物质诱导，还可由与特异性胞外蛋白质抑制物化合的整比化合物诱导(Nagase，H.and Salvesen，G.(1993)in Innovations in Proteases and theirInhibitors(Aviles，F.X.，ed.)，pp.315-332，Walter de Gruyter，Berlin)。第二个哺乳动物金属酶家族为膜整合蛋白，还包括内肽酶24.11(E24.11)，内皮缩血管肽转化酶(ECE)以及meprin。E24.11以及ECE与原核生物的嗜热芽孢菌蛋白酶具有相似的活性位点，而meprin是金属蛋白虾红素(一种含锌的内肽酶)家族的成员。E24.11与ECE的底物是相对小的肽链，meprin能够作用于较大的蛋白并可降解胞外基质成分。胞外蛋白代谢的缺陷对于各种疾病例如组织细胞瘤，淋巴瘤，结肠癌，肺癌，成视网膜细胞瘤都是重要的，而金属蛋白酶可用于形成进入靶向物以插入适当的抑制剂的疗法。

近来发现一种新的哺乳动物非整合金属蛋白酶(MADM)，这种蛋白中含有胞外金属蛋白酶以及非整合区域，一个跨膜螺旋以及一个碱性的/富含脯氨酸的胞质C-端。MADM与reprolysin蛋白家族成员关系较远，后者包括蛇毒非整合-金属蛋白酶以及一些细胞表面非整合哺乳动物蛋白。MADM的蛋白水解酶区域含有一个延伸的锌-结合位点HEVGHNFGSPH，后面紧接非整合的富含半胱氨酸的区域，这个富含半胱氨酸区域由一个19个氨基酸的片段与跨膜螺旋相连(Howard，L.，Lu，X.，Mitchell，S.，Griffiths，S.and Glynn，P.，Biochem.J.317(Pt1)，45-50(1996))。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人非整合蛋白-金属蛋白酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11。

由于如上所述人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人非整合蛋白-金属蛋白酶11.11异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：