[发明专利]一种新的多肽——人RNA多聚酶I－40KD亚基12.87和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

DNA为RNA的酶，真核细胞中有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶I，RNA聚合酶II，RNA聚合酶III。RNA聚合酶I基本不受alpha-鹅膏蕈碱的抑制，在大于10^-3mol/L时才表现出轻微的抑制作用；RNA-聚合酶II对于alpha-鹅膏蕈碱最为敏感，在10^-9-10^-8mol/L浓度下就会被抑制；RNA聚合酶III的敏感性介于I，II之间，在10^-5-10^-4时表现抑制作用。RNA聚合酶I存在于核仁中，其功能是合成5.8SrRNA，18SrRNA和28SrRNA；RNA聚合酶II存在于核质中，其功能是合成mRNA以及snRNA；RNA聚合酶III也存在于核质中，其功能是合成tRNA和5SrRNA以及转录Alu序列。三种主要的RNA聚合酶的分子量都在500Kda左右(14S^-15S)，每种酶分子含有两个大亚基和4-8个小亚基，每个小亚基的分子量为10Kda-90Kda。不同种类的基因需要不同的蛋白质辅助因子协助RNA聚合酶进行工作。此外在真核生物的线粒体中亦发现有少数RNA聚合酶，它们分子量小，活性也较低，这是与细胞器DNA的简单性相适应的。这些RNA聚合酶都是核基因编码，并在细胞质中合成以后在运送到细胞器中的。

RNA多聚酶I(RPI)是一种由约八至九个不同多肽亚基构成的一种酶，这些亚基的分子量从17,000道尔顿到190,000道尔顿不等。该酶位于所有真核生物细胞的核中。这种酶负责转录位于核中的核糖体RNA，它是一种复合物并含有许多抗原决定簇或抗原决定部位，其中有一些是与别的蛋白共享的。现又发现一种新的RNA多聚酶I亚基，因其分子量为40KD，故被称为RNA多聚酶I-40KD亚基。该蛋白缺乏将会引起RNA多聚酶I异常，从而引发一系列与RNA多聚酶I(RPI)负责转录位于核中的核糖体RNA相关的疾病，例如自身免疫性疾病中的风湿性疾病等(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95(14)，8175-8180(1998))。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人RNA多聚酶I-40KD亚基的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87。

由于如上所述人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人RNA多聚酶I-40KD亚基12.87异常相关的疾病的方法。