[发明专利]一种新的多肽——核苷酸还原酶10.49和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——核苷酸还原酶10.49，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在哺乳动物组织和微生物中，脱氧核苷酸都是由相应的核苷酸通过以氢替代2’-OH基团而形成的。催化这种核苷酸还原的有两种类型的核糖核苷酸还原酶。在自然界广泛分布并存在于哺乳动物细胞中的一类酶含有非正铁血红素，其由一种以上的多肽链组成，对二磷酸(ADP、GDP、CDP及UDP)还原作用具有专一性。而第二种酶局限于某些微生物中，这类酶只含有一种多肽链，但在某些情况下形成寡聚物。

核苷酸还原酶在生物体内催化脱氧核糖核苷酸的还原合成，其提供了DNA合成所必需的前体。在哺乳动物细胞中，核苷酸还原酶是一种多聚酶，由一个大的亚单位(约由700-1000个氨基酸残基组成)和一个小的亚单位(约由300-400个氨基酸残基组成)所组成。

小的亚单位在生物体内与两个铁离子结合(蛋白氨基酸序列中的谷氨酸、天冬酰胺及两个组氨酸均参与金属离子的结合)，且在该亚单位中还含有以活性酪氨酸位点。在原核生物、真核生物及病毒中均含有这种类型核苷酸还原酶，且它们的小亚单位均含有金属离子结合残基和活性酪氨酸位点[Peter Reichard，1993，Science，260：1773-1776]。

研究发现，所有上述的核苷酸还原酶均含有如下所示的保守的一致性序列片段：[LIVMSEQ]-E-X(1，2)-[LIVTA]-[HY]-[GSA]-X-[STAVM]-Y-X(2)-[LIVMQ]-X(3)-[LIFY]-[IVFYCSA]；该序列片段是还原酶与铁离子结合，发挥其还原功能的活性位点。该序列中的E、H即为酶与铁离子的结合位点，而Y是酶活性位点氨基酸残基。该序列的突变，可能会导致酶活性的丧失，从而影响脱氧核糖核苷酸的合成，进而影响整个生物体遗传信息载体DNA的合成。由此可见，该蛋白在生物体内有着及其重要的作用，其从一级水平调节着生物体遗传信息的表达，该蛋白的表达异常通常与一些发育紊乱症、代谢紊乱症等疾病的发生密切相关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与核苷酸还原酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为核苷酸还原酶10.49。

由于如上所述核苷酸还原酶10.49蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的核苷酸还原酶10.49蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新核苷酸还原酶10.49蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——核苷酸还原酶10.49以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码核苷酸还原酶10.49的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码核苷酸还原酶10.49的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产核苷酸还原酶10.49的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——核苷酸还原酶10.49的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——核苷酸还原酶10.49的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与核苷酸还原酶10.49异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；