[发明专利]一种新的多肽——人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白15和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白15，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞对细胞外特殊信号分子的反应能力依赖于细胞具有特殊的受体。亲水性信号分子包括神经递质、生长因子、细胞因子、局部化学递质和大多数激素，它们不能穿过质膜，只能与细胞表面的受体结合形成配体受体复合物进行信号转导。根据信号转导的机制和受体蛋白的类型，细胞表面受体可分为3种：(1)离子通道耦联的受体；(2)连接酶的表面受体；(3)与G蛋白耦联的受体。在生物体内含有大量的生长因子受体蛋白，这些生长因子受体蛋白与各种信号因子结合，以正确地调节生物体内的各种生理反应。其中神经生长因子受体及肿瘤坏死因子受体(NGFR/TNFR)构成了一独立的神经生长因子受体及肿瘤坏死因子受体(TNFR/NGFR)超家族[Mallet S.，Barclay A.N.，1991，Immunol Today，15：220-223]。神经生长因子受体蛋白可能在生物体内调节着神经细胞对神经生长因子的信号反应，以协调神经系统的新陈代谢，发挥正常的生理功能；而肿瘤坏死因子受体在生物体内与其相关信号因子如肿瘤坏死因子结合，可有效地引起肿瘤细胞反应，促进肿瘤细胞破坏，抑制肿瘤细胞的无限增殖。该类蛋白的表达异常将导致神经系统的生长发育异常，及组织细胞的异常增殖及蛋白的异常表达，从而引发各种与之相关的疾病，如：各种恶性肿瘤及癌症、各种神经系统病症，各种发育紊乱症等。

研究发现，该超家族的成员氨基酸序列N末端均含有一由110-160个氨基酸残基组成的、富含半胱氨酸残基的结构域。该结构域含有以下保守的一致性序列片段：C-X(4，6)-[FYH]-X(5，10)-C-X(0，2)-C-X(2，3)-C-X(7，11)-C-X(4，6)-[DNEQSKP]-X(2)-C。该结构域可分为四种不同的模式，约40个氨基酸残基中含有6个保守的半胱氨酸残基，其中六个半胱氨酸残基均与链内二硫键的形成有关[Banner D.W.，Janes W.et al.，1993，Cell，73：431-445]。肽链形成正常的构象是受体蛋白具有活性、发挥正常生理学功能的基础。该保守的序列片段是蛋白形成活性构象的中心区域，在蛋白发挥正常功能中起着重要的调节作用。该序列片段中的氨基酸残基突变将导致蛋白的失活。从而引发各种与该蛋白表达相关的疾病。

在细胞色素C蛋白家族的成员中，血红素基团通过硫醚键与两个保守的半胱氨酸残基紧密结合。该结合位点含有一致的序列：C-CPWHF-CPWR-C-H-CFYW；序列中的组氨酸是血红素铁的两个中心配基中的一个。该保守序列是蛋白与铁离子结合，形成特定的结构以完成电子传递及能量转换过程的重要结构区域。该中心区域的突变很可能是导致蛋白功能异常的直接原因，使蛋白不能正常的完成各种能量转换过程，从而引发各种相关的疾病。

本发明的新的人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白亦含有神经生长因子受体及肿瘤坏死因子受体超家族N末端保守的氨基酸序列片段及一保守的细胞色素C保守序列片段，因而其为人神经生长因子受体及肿瘤坏死因子受体超家族的新成员，并与该家族的其他成员相似，具有相似的生物学功能，在生物体内与各种恶性肿瘤及癌症、各种神经系统病症，各种发育紊乱症相关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白15。

由于如上所述人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白15蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白15蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人含细胞色素C结构域的TNFR/NGFR蛋白15蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。