[发明专利]一种人补体成分亚基链蛋白异构体及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、免疫学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类树突状细胞中表达的hC1QA-iso蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

血清中补体系统的第一个组分C1是由亚基C1Q与另外两个亚基酶原C1R、C1S结合而成的。C1Q的类胶原结构域与钙离子依赖的C1R(2)C1S(2)酶原复合物结合，形成球状的“头部”结构与抗体IGG或者IGM的FC区相互作用，从而产生C1有效的免疫活性。C1是一种钙依赖的三聚复合物，由C1Q、R、S按1∶2∶2的摩尔比聚合而成。C1Q亚基又由9个小亚基组成，其中6个是二硫键连接的A、B链二聚体，另外三个是二硫键连接的C链二聚体。(Biochem．J．274：481-490，1991)。

C1Q中A链的缺失会导致C1Q的缺失，从而使C1不能正常形成，相应的免疫功能形成缺陷，造成遗传病红斑狼疮的发生。(Immunobiology 199：286-294，1998)。

本发明中，我们在人类树突状细胞中克隆到人hC1QA基因的异构体同源基因hC1QA-iso。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hC1QA-iso蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hC1QA-iso(Genbank AccessionNo．AF260332)，该基因是一个人hC1QA-iso蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hC1QA-iso。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hC1QA-iso蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hC1QA-iso蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hC1QA-iso蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．6中从核苷酸第19-861位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO．6中从核苷酸第19-861位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO．7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO．6中从核苷酸第19-861位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hC1QA-iso蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO．7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO．7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hC1QA-iso蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hC1QA-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hC1QA-iso蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．6中从核苷酸第19-861位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hC1QA-iso蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hC1QA-iso蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hC1QA-iso蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO．6中第19-861位的序列。

本发明还提供了与hC1QA-iso蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。