[发明专利]一种人早期核内体抗原蛋白异构体及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肾上腺中表达的hEEA1-iso蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

早期核内体由原生质膜摄取胞内物质并进行加工，形成囊泡运输给成熟的核内体或溶酶体，或者返回原生质膜参与再循环。人们通过免疫荧光法为早期核内体定位时，发现它较多的集中在转铁蛋白受体上，同时发现在此中的早期核内体中有一进化保守的蛋白质，命名为早期核内体抗原(Early Endosome Antigenl，EEA1)。进一步的研究发现EEA1与囊泡运输有关(J Biol Chem 1995 Jun 2；270(22)：13503-11)。

本发明中，我们在人类肾上腺中克隆到人hEEA1基因的同源基因hEEA1-iso。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hEEA1-iso蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hEEA1-iso(Genbank AccessionNo．AF225416)，该基因是一个人hEEA1-iso蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hEEA1-iso。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hEEA1-iso蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hEEA1-iso蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hEEA1-iso蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．6中从核苷酸第103-777位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO．6中从核苷酸第103-777位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO．7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO．6中从核苷酸第103-777位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hEEA1-iso蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO．7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO．7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌：在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hEEA1-iso蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hEEA1-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hEEA1-iso蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．6中从核苷酸第103-777位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hEEA1-iso蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hEEA1-iso蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hEEA1-iso蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO．6中第103-777位的序列。

本发明还提供了与hEEA1-iso蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。