[发明专利]一种新的多肽——RNA3’末端磷酸环化酶9.24和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——RNA 3’末端磷酸环化酶9.24，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

化酶能够催化位于RNA末端的ATP依赖的3’-磷酸转变为2’，3’-磷酸二酯环。在发生tRNA切割时，它保持了反应中间物尾部的环状结构，并且，它还与U6 snRNA的3’末端的环化有关。

RNA 3’末端磷酸环化酶的cDNA编码一条39.4Kda的蛋白，含有366个氨基酸，其等电点为7.8。在脊椎动物中，位于起始密码子(TCCCCCATGG)附近的序列与起始密码子相似(GCCACCATGG)(Kozak，1987)。170-nt的5’末端前导序列包含了一个附加的ATG密码子(包含在CCAGGCATGA中)，但是从该翻译起始位点开始的翻译将在其下游的5个密码子处发生终止，因此这段翻译是无意义的。在属于RNA环化酶家族的蛋白成员中没有发现明显的与其它蛋白结构域相似的结构，特别是没有可辨别的核苷结合区域或RNA结合区域。

当3’-磷酸化尾巴缺失时，人类环化酶有潜在的能力激活5’末端pAAAAUAAAAG发生磷酸化，但是即使使用大量的环化酶，也没有发现A5’pp5’A形式的存在。与之相同，不论在5’或是3’末端，都没有环化酶催化的磷酸化的寡聚核苷酸的内部或外部分子链结构存在。将RNA环化酶和已知的RNA连接酶进行序列比较，也没有找到明显的相似之处(Rand and Gait，1984；Phizicky et al.，1986；Arnand Abelson，1996)。

在哺乳动物细胞中，RNA 3’末端磷酸环化酶在RNA加工过程中起着较为重要的作用，并且还参与了发生在细胞核中的其他一些RNA代谢反应。该环化酶还能够促进U6 snRNA的3’末端磷酸发生环化反应，在大多数真核细胞中，U6 snRNA包含了2’，3’环化的磷酸尾巴(Lund and Dahlberg，1992)。另外，该环化酶还可能再生被3’-单酯终止分子的环化尾巴。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc末用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与RNA 3’末端磷酸环化酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为RNA 3’末端磷酸环化酶9.24。

由于如上所述RNA 3’末端磷酸环化酶9.24蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的RNA 3’末端磷酸环化酶9.24蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新RNA 3’末端磷酸环化酶9.24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——RNA 3’末端磷酸环化酶9.24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码RNA 3’末端磷酸环化酶9.24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码RNA 3’末端磷酸环化酶9.24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产RNA 3’末端磷酸环化酶9.24的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——RNA 3’末端磷酸环化酶9.24的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——RNA 3’末端磷酸环化酶9.24的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与RNA 3’末端磷酸环化酶9.24异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；