[发明专利]一种新的多肽——Kruppel型锌指蛋白ZK23.65和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞外环境中的一些电离辐射能够导致细胞内产生一系列反应，从而引起细胞的生长受到阻碍。同时也伴随着细胞内DNA的修复以避免细胞的死亡，但是往往这种修复反应是不足的，因此还是会出现细胞的程序性死亡现象。研究证明，在哺乳动物细胞中，一些转录因子基因诸如JUN、FOS、EGR-1、p53等会引起细胞对于电离辐射更加敏感(Hallahan，D.E.，Sukhatme，V.P.et al.，1991；Fornace，A.J.J.，1992；Brach，M.A.，Hass，R.et al.，1991)。这些早期反应基因能够调节下游基因，从而影响到细胞对于辐射诱导的敏感性。因此，转录因子能够介导这些反应，C2H2型锌指(ZNF)基因家族就是最好的证明，ZK1是该基因家族的成员之一。

ZK1包含了2580个核苷酸，其中包括一段多聚腺苷酸信号，其编码的蛋白包含了671个氨基酸残基。ZK1蛋白的ZNF区域与ZFP36和EGR1蛋白具有高度的同源性，也属于Kruppe1型ZNF蛋白家族，并且它的N末端有一个KRAB(Kruppe1结合盒)结构，C末端有15个连续的ZNF结构域。大约三分之一的Kruppe1型ZNF基因同时包含了KRAB-A盒和KRAB-B盒两个区域，有一个75个氨基酸的特殊结构(Bellefroid，E.J.，Poncelet，D.A.et al.，1991)。但是ZK1蛋白不同，它的KRAB区域只有KRAB-A盒，而缺少了KRAB-B盒，这与在ZNF136和ZFP36蛋白中观察到的相同。

ZK1基因位于人类染色体19p13.2上。ZK1的mRNA信号几乎在所有的组织中都能找到，其mRNA水平在肾脏、脾脏、肺、胎盘和卵巢中较高，但是在脑、心脏、肝、小肠和前列腺中含量很低。

ZK1基因增加了电离辐射的敏感性，它能够使细胞更加暴露于电离辐射，从而增加了程序性死亡细胞的数量。细胞程序性死亡除了受到外界环境的影响外，它也可以是一种细胞的生理控制机制，在这种情况下，属于正常的细胞自然死亡。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与Kruppe1型锌指蛋白ZK的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65。

由于如上所述Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与Kruppe1型锌指蛋白ZK23.65异常相关的疾病的方法。