[发明专利]一种新的多肽——人GTP结合蛋白RhoA9.46和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人GTP结合蛋白RhoA9.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

小的GTP酶，它首先从哺乳动物组织的膜(Yamamoto，K.，Kondo，J.et a1.，1988)和胞液(Morii，N.，Sekine，A.et al.，1988)片段中纯化得到。在哺乳动物体内，Rho存在三种异构形式，它们分别是RhoA、RhoB和RhoC，三种形式在序列上显示了高度的同源性(相似性为83％)(Simon，M.，1996)。与其它的GTP酶一样，Rho循环于GTP结合形式和GDP结合形式之间，GTP结合形式的活化是由其自身的GDI、GEF和GAP调节的。GTP结合和GDP结合形式之间的互换使得Rho成为一种分子开关，调节细胞内的信号通路。RhoA蛋白是一种重要的Rho家族成员，能够引起肌动蛋白的重新组织，并且介导静止的纤维原细胞上集中粘连和应力纤维的形成。最近的一些研究发现，它还有许多其它功能，除了纤维原细胞以外，主要还涉及不同种细胞类型的迁移和转移。

RhoA的结构以折叠结构为主，形成一个由6条链平行折叠组成的平面结构，其周围包围着一些螺旋结构，并且还连接有环状结构，这些结构非常保守，另外还有一些螺旋与小的GTP酶相连接。RhoA的N末端(Glu125—Lys133)含有一段13个残基的插入区域，形成一个附加的螺旋结构(A3’)，后部跟随一个环，不仅仅是RhoA蛋白，Rho家族的其它蛋白也含有该插入区域。开关I环与自平行面的B2链相连，GTP/GDP的结合强度以及小GTP酶的GTP酶活性完全依赖于二价离子(Mg2+)的存在，Mg2+在集中磷酸结合功能区域、开关I、开关II中起着关键的作用。糖基化的RhoA诱导肌动蛋白丝的解体，GDP结合的RhoA还是GTP结合的RhoA毒素B的高级底物。

Rho能够分别与GTP和GDP结合，并且通过自身调节的方式调节其结合活性。Rho也参与细胞骨架对细胞外信号包括溶血磷脂酸和某些引起集中粘连和应力纤维形成的生长因子的反应(Machesky，L.M.，and Hall，A.，1996；.Takai，Y.，Sasaki，T.et al.，1995)。最近还发现，Rho能够调节细胞浆运动、平滑肌紧缩(Amano，M.，Ito，M.et al.，1996；Amano，M.，Chihara，K.et al.，1997)。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人GTP结合蛋白RhoA的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人GTP结合蛋白RhoA9.46。

由于如上所述人GTP结合蛋白RhoA9.46蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人GTP结合蛋白RhoA9.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人GTP结合蛋白RhoA9.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人GTP结合蛋白RhoA9.46以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人GTP结合蛋白RhoA9.46的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人GTP结合蛋白RhoA9.46的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人GTP结合蛋白RhoA9.46的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽—-人GTP结合蛋白RhoA9.46的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人GTP结合蛋白RhoA9.46的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人GTP结合蛋白RhoA9.46异常相关的疾病的方法。