[发明专利]一种新的多肽——凝血因子V12.32和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——凝血因子V12.32，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

心脏或血管腔内，血液发生凝固或血液中的某些有形成分互相凝集，形成固体质块的过程，称为血栓形成，在这个过程中所形成的固体质块称为血栓。血液中存在着相互拮抗的凝血系统。在生理状态下，血液中的凝血因子不断地被激活，从而产生凝血酶，形成微量纤维蛋白，沉着于血管内膜上，但这些微量的纤维蛋白又不断地被激活了的纤维蛋白溶解系统所溶解，同时被激活的凝血因子也不断地被单核吞噬细胞系统所吞噬。

人凝血因子V是一个高分子量的血浆糖蛋白，是快速凝血酶形成和正常止血所必须的。它以大的单个肽链形式在血液中循环时是几乎没有凝结活性的。在血液凝结过程中通过凝血酶的有限水解，凝结因子V转换为因子V_a，从而暴露出因子X_a和凝血素的结合位点。因子V_a由一条重链和一条轻链组成，钙离子将这两条链连接。剩下的原始因子V作为一个大的连接片段被释放，该连接片段富含糖类。因子V_a通过轻链结合在细胞带负电荷的磷脂表面，并通过X_a增加凝血素激活的效率。因子V_a很容易被蛋白质C失活，从而导致重链分裂成两条小的片段。除了在激活凝血素，人因子V_a也能通过细胞表面的磷脂的凝血酶来刺激激活蛋白质C，这些反应只需要轻链的参与。

在凝血因子V的激活过程中，凝血酶打断几个肽键从而增加一条重链，一条连接片段和一条轻链。轻链是通过打断精氨酸-丝氨酸肽键形成。轻链与C末端片段在氨基酸水平上有40％的同源性。所有的片段都有一个相似的结构域结构，它包括一个单独的血浆铜蓝蛋白相关结构域和两个紧随其后的C结构域。连接区域的C末端和VIII无太大的氨基酸序列同源性。凝结因子V的酸性非常大并包含许多N连接的糖基化位点，亦包括20个由9个氨基酸残基组成的重复子。

凝血因子V有许多化学和生化特征与因子VIII相似。例如，因子VIII也能被凝血酶转换成活性形式，并且该活性分子能通过因子IX_a来增加因子X的激活率。因子VIII_a的辅助效应与因子V_a在激活凝血素上是相类似的。另外，牛因子V_a重链和轻链的N末端与因子VIII_a的相应区域有很大的同源性。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与凝血因子V的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为凝血因子V12.32。

由于如上所述凝血因子V12.32蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的凝血因子V12.32蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新凝血因子V12.32蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——凝血因子V12.32以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码凝血因子V12.32的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码凝血因子V12.32的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产凝血因子V12.32的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——凝血因子V12.32的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——凝血因子V12.32的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与凝血因子V12.32异常相关的疾病的方法。