[发明专利]一种新的多肽——tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

移酶(TGT)参与特异性的Asn、Asp、His、Tyr的tRNA反密码子的修正，引起位于摆动位点的鸟嘌呤-34的替换。TGT的进体结构显示其含有一个不规则的(β/α)₈桶和一个紧密连接的C末端包含锌离子的亚区域，桶与该亚区域的连接是依靠一个靠近C末端的α螺旋结构实现的，它置换了(β/α)₈桶的第8个螺旋结构。这种tRNA结合模型与一种涉及共价tRNA-酶中介的碱基转换机制相一致，这种结构也是(β/α)₈桶蛋白特异性与核酸相互作用的一个例子。

TGT的N末端折叠成一个3链的自体平行β折叠，以帽状结构盖住了(β/α)₈桶结构上8链的β桶的N末端表面(Reardon and Farber，1995)。虽然该桶含有8条平行的β链，链与链之间的连接并不仅仅通过单一的螺旋结构(在典型的(β/α)₈桶结构中是如此)。紧随在(β/α)₈桶的8条链之后的是螺旋α12，它位于β桶结构的上面并将之连接到C末端亚区域。C末端亚区域包含一个锌离子，该部分结构紧密，一个很长的靠近C末端的α螺旋(α15)形成该区域与(β/α)₈桶的分隔界面。α15螺旋能够取代(β/α)₈桶的第8个螺旋的功能，并且其结构也可以描述为包含一个锌离子结合区域的(β/α)₈桶插入物。

锌离子与另外的3个Cys残基(C318、C320、C323)和1个His(H349)形成四面体结构，该锌离子结合区域(CXCX₂CX₂₉H)在所有已知的TGT序列中都是保守的，在α15螺旋界面上His残基的存在对于C末端亚区域与(β/α)₈桶的锚定至关重要。

TGT催化一种碱基交换，它使鸟嘌呤核苷34的N-糖苷键发生断裂，并且与preQ1形成一个新的糖苷键，其中还存在一个共价的中间状态。碱基交换机制还需要反密码子环的构象发生变化，该环状结构较为柔软(Ruff et al.，1991)。催化机制分以下若干步骤：1)通过反密码子干-环-主链和以螺旋α12连接的锌结合亚区域之间的静电接触使tRNA定位到酶的表面；2)反密码子环构象发生变化，以便于鸟嘌呤核苷34结合到preQ1上相应位点处；3)C1’上羧化D102亲核攻击，使得糖苷键发生断裂，并且形成共价的TGT-tRNA中间物；4)preQ1替代鸟嘌呤核苷；5)preQ1的N9原子对C1’进行亲核攻击，形成新的糖苷键。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与tRNA鸟嘌呤糖基转移酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82。

由于如上所述tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——tRNA鸟嘌呤糖基转移酶17.82的抗体。