[发明专利]一种新的多肽——3－磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

团磷酸化来调节酶的活性形式和非活性形式的相互转化。已知的激酶有PKA、PKB、PKC等，当胰岛素、生长因子等作用于哺乳动物细胞时，能诱导蛋白激酶B的308位苏氨酸(该苏氨酸仅在含有P3或P2的脂质囊才能发生磷酸化)、473位丝氨酸进行磷酸化，使蛋白激酶B的活性显著增强，它位于细胞内的3-磷酸肌醇激酶。

1997年，Alessi DR等人克隆出一新的人蛋白激酶—PKD1。它定位在人16号染色体长臂13.3区域，分布在人体所有组织，它和果蝇蛋白激酶DSTPK61同源，调节性别分化、卵细胞发生及精子形成。PKD1能使α-PKB的308位苏氨酸磷酸化，提高PKB的活性30倍。PKD1存在于许多磷脂肌醇中，仅需微摩尔浓度的D型的磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸盐(P3)或磷脂酰肌醇-3，4-二磷酸盐(P2)就能显著地增强PDK-1的活性。PKD1这个556个残基组成的单体酶包含一个和PKA、PKB、PKC的激酶亚家族近似的催化结构域和一个羧基末端激酶底物同源结构域，它不不受渥曼青霉素的影响，因而不属于3-磷酸肌醇激酶家族。PDK1可能是一种通过胰岛素或生长因子来介导蛋白激酶B的活性的激酶，P3或P2和α-PKB的结合需要PDK1提供磷酸化及活化。它可能在介导第二信使P3和P2的活性中起重要作用。过度表达的PDK1提高α-PKB的活性，增加IGF-1诱导的α-PKB的308位的苏氨酸的磷酸化。IGF-1并不影响PDK1的活性或磷酸化作用。[Alessi，D.R.，CurrBiol.1997，7(4)：261-269]

PDK1分布于人体各组织，对于调节各种酶的催化效力有十分显著的功效，也在磷脂酰肌醇信号通路中起重要作用。在生物体内，关系到特殊基因转录的增强，与性别决定有关。若表达异常，会引起一系列疾病，并出现各种异常现象。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32。

由于如上所述3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另—个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32的方法。

本发明的另-个目的是提供针对本发明的多肽——3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与3-磷酸肌醇依赖型蛋白激酶D1(PKD1)45.32异常相关的疾病的方法。