[发明专利]一种新的多肽——甲基化－CpG结合蛋白9.24和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——甲基化-CpG结合蛋白9.24，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

核生物基因组的主要修饰方式，在脊椎动物中，这种修饰一般发生在5′-CpG。MeCP 2和MBD1是已知的甲基化-CpG结合蛋白家族的成员，它们能够通过相关联的氨基酸区域特异性地和甲基化的DNA结合，并能抑制转录。它们都不和单链DNA结合，无论其甲基化与否，它们也不和含有重复TpG序列的寡核苷酸结合，仅与含甲基CpG的双链DNA结合。

1999年Brian Hendrich等人克隆的MBD2，MBD3，MBD4基因是该基因家族的新成员。它们有甲基化CpG结合区域，MBD2和MBD4共同定位于高度甲基化的DNA卫星序列，而MBD3不和甲基化的DNA结合，也不定位在主卫星峰，造成它们这种差别的原因可能是蛋白质的MBD部分不同。MBD1，MBD2，MBD3，MBD4基因在生物体各组织中都有表达，但MBD1，MBD2在胚胎中表达降低或缺乏，MBD3在胚胎干细胞中表达水平仍高。MBD1基因能通过改变结合而使含有2-3个CxxCxxC编码的外显子的蛋白质发生改变，第三个外显子结合的改变使其后的外显子不能维持正确的阅读框，使C端29个氨基酸被44个氨基酸替代，而使成熟的RNA不能编码正常功能的蛋白质；MBD2基因的结合改变会产生一条很长的、含有第四个外显子改变的转录本，这第四个外显子具一终止密码子；MBD3基因的第一个外显子对于整个基因很重要；MBD4基因的结合改变也会影响转录本；所有这些改变都不影响MBD的编码序列。MBD1、MBD2的转录产物MeCP1、MeCP2在任意序列中与甲基化的DNA特异性结合，两者都能抑制转录，它们在DNA甲基化信号的翻译中起重要作用。MeCP1是一400-800KD的巨蛋白复合物，它与DNA结合需要10个以上的甲基CpG，它可能与特殊基因的DNA甲基化所介导的转录抑制有关，高度及低度甲基化的启动子所启动的转录都能被它抑制。MeCP1在成体细胞和组织中普遍存在，但在胚胎干细胞中缺乏，它可能在成体细胞的DNA甲基化所介导的基因抑制中起重要作用。MeCP2含有一条具甲基CpG结合结构域及转录抑制结构域的多肽，它能和一对对称甲基化的CpG结合，并且可在含甲基化的DNA位点与染色体结合，该基因能抑制基因组范围的转录。MBD1可与低甲基化的DNA结合，MeCP2则需与更高甲基化的DNA结合，MBD2和MBD4仅与高度甲基化的DNA结合。[Genes，1999，13(15)：1924-35]

DNA5′-CpG的甲基化在哺乳动物发育中是必需的，它关系到DNA能否正常转录，关系到生物体的发育、分化等。甲基化结合蛋白分布于生物体各种组织、细胞，它能抑制转录，从而防止基因的过度表达。若发生变异，则会引起肿瘤等一系列疾病。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与甲基化-CpG结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为甲基化-CpG结合蛋白9.24。

由于如上所述甲基化-CpG结合蛋白9.24蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的甲基化-CpG结合蛋白9.24蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新甲基化-CpG结合蛋白9.24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——甲基化-CpG结合蛋白9.24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码甲基化-CpG结合蛋白9.24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码甲基化-CpG结合蛋白9.24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产甲基化-CpG结合蛋白9.24的方法。