[发明专利]一种新的多肽——RNA聚合酶Ⅱ亚基11和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——RNA聚合酶II亚基11，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

酶为RNA聚合酶，与DNA聚合酶不同的是RNA聚合酶能起始一条新链的合成，起始的核苷酸一般是嘌呤核苷三磷酸，而且将在RNA链的5’末端保持这一磷酸基团。

大肠杆菌的RNA聚合酶由五个亚基所组成，即α₂ββ’δ。这四种亚基的分子量分别为36.5KDa、150KDa、160KDa、16KDa，整个酶分子的分子量为465Kda，是目前已知的最大的酶之一。真核细胞中有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶I、RNA聚合酶II、RNA聚合酶III。真核生物RNA聚合酶I存在于核仁中，其功能是合成5.8SrRNA、18SrRNA、和28SrRNA；RNA聚合酶II存在于核质中，其功能是合成mRNA以及snRNA，mRNA是由聚合酶II和许多控制转录起始、延伸和终止选择性和效率的蛋白辅助因子所组成的转录复合物来合成的；RNA聚合酶III也存在于核质中，其功能是合成tRNA和5SrRNA以及转录Alu序列。就已经发现的几种真核生物RNA聚合酶II而言，它们至少由10个不同的肽段组成，分子量处于220-10Kda之间[Giorge V.Shpakovski，Joel Acker et a1.，1995.Mol.Cell.Biol.15(9)，4702-4710]。

真核生物的RNA聚合酶II亚基的多肽序列在C末端有高度的保守性，对应于规范的锌结合结构域有一个不变的基元序列CX₂CX₁₂RCX₂CGXR。人的RNA聚合酶II亚基Hs10β基因有381bp包含一个201bp的开放阅读框，其编码蛋白质的分子量为7645Da，等电点为7.65，有六个形成CX₂CGX_NCCR基元的恒定氨基酸残基。两对半胱氨酸残基由不同的基因外元编码，这两个半胱氨酸残基被一个真核生物中高度保守但在大小和顺序上有所差异的结构域隔开[Treich，I.，M.Riva，andA.Sentenac.1991.J.Biol.Chem.266：21971-21976]。

尽管世界上第一个RNA聚合酶是从哺乳动物细胞在中分离出来的，但是直到至今，人们关于真核细胞的了解远远不如对大肠杆菌RNA聚合酶那样清楚，所以有关哺乳动物RNA聚合酶II亚基的结构和功能还有待于进一步的研究。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与RNA聚合酶II亚基的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为RNA聚合酶II亚基11。

由于如上所述RNA聚合酶II亚基11蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的RNA聚合酶II亚基11蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新RNA聚合酶II亚基11蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——RNA聚合酶II亚基11以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码RNA聚合酶II亚基11的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码RNA聚合酶II亚基11的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产RNA聚合酶II亚基11的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——RNA聚合酶II亚基11的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——RNA聚合酶II亚基11的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与RNA聚合酶II亚基11异常相关的疾病的方法。