[发明专利]一种新的多肽——人类DNACGG重复结合蛋白31.57和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人类DNA CGG重复结合蛋白31.57，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

重复DNA是人类基因组的主要组成部分。已经发现非稳定三线重复序列与几种主要的神经退行性变疾病有关[Warren，S.T.，andNelson，D.L.1993.Curr.Opin.Neurobiol.3，752-759][Warren，S.T.1996.Science271，1374-1375][Ashley，C.T.，Jr.，andWarren，S.T.1995.Annu.Rev.Genet.29，703-728]。这些重复序列的扩增能终止相邻基因的表达或当重复序列是编码序列的一部分时，直接影响它们的氨基酸顺序[Pieretti，M.，Zhang，F.P.，Fu，Y.H.，Warren，S.T.，Oostra，B.A.etal.1991.Ce1166，817-822][Chung，M.Y.，Ranum，L.P.，Duvick，L.A.etal.1993.Nat.Genet.5，254-258]。脆性X染色体综合症(FraX)通常导致男性智力迟钝。正常人位于Xq27.3上的5’(CGG)_n-3’重复子通常的n值为6-50，而在非症状前突变携带者的相应染色体上该值可以达到50-200，并且通过母性遗传同时又加上这些扩增重复子甲基化的话，则直接导致脆性X染色体综合症的发生[Chiurazzi，P.，Pouponi，M.G.，Willemsen，R.，Oostra，B.A.，etal.1998.Hum.Mol.Genet.7，109-113]。5’-(CGG)_n-3’重复子位于脆性X染色体综合症1基因(FMR1)的5’非翻译区(UTR)。如果n值大于200同时该基因甲基化失活，则该基因产物会广泛表达于人类的许多组织，首先就是人的神经系统[Devys，D.，Lutz，Y.，Rouyer，etal.1993.Nat.Genet.4，335-340]。

最近，生物学家从人类HeLa细胞核中发现了一个20kDa的5’-(CGG)_n-3’-结合蛋白，命名为CGGBP1或p20蛋白。p20蛋白是一个核蛋白，丰富表达于哺乳动物中[Deissler，H.，Wilm，M.，Genc，et al.1997.J.Biol.Chem.272，16761-16768]，并且在人类基因组中特异结合于5’-(CGG)_n-3’重复子。p20蛋白位于核内并且在80和84之间携带核定位信号(NLS)，位于69和71之间以及95和167之间的氨基酸残基负责与5’-(CGG)_n-3’的结合。

由于p20蛋白能够结合人类FMR1蛋白的启动子，所以p20蛋白(至少在人类细胞中过表达时)能够降低该启动子的活性，并且抑制的程度可能取决于5’(CGG)_n-3’重复子的长度，尤其当重复子扩增时。p20蛋白可能在与5’(CGG)_n-3’结合时以低聚体的形式存在。

P20蛋白能特异性结合在人类染色体13，14，15，21和22的短臂上与28s核糖体RNA基因相关的富含5’(CGG)_n-3’区域。在接下来的5’(CGG)_n-3’重复子扩增反应中，p20蛋白能使FMR1基因失活。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人类DNA CGG重复结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人类DNA CGG重复结合蛋白31.57。

由于如上所述人类DNA CGG重复结合蛋白31.57蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人类DNA CGG重复结合蛋白31.57蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人类DNA CGG重复结合蛋白31.57蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。