[发明专利]一种新的多肽——四次跨膜蛋白14.19和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——四次跨膜蛋白14.19，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

四次跨膜蛋白超家族(TM4SF)是一族古老的蛋白质，已知的该超家族成员有：CD9、CD37、CD53、CD63、CD81、CD82、CD151、Co-029、NAG-2和Ta11a-1。该蛋白存在四个跨膜的结构域，这四个结构域定位于两个非对称的细胞外区域。这些分子有一个彼此相似的重要序列，它们中的一些在跨膜结构域2和3之间还有一信号序列。全部有核细胞都表达一系列四次跨膜蛋白，其中，CD9、CD63、CD82基因的表达产物与一些癌症的转移呈负相关，它们在这些肿瘤细胞中作为转移的抑制子而减少转移的发生，该效应与大分子复合物包含的四次跨膜蛋白有关，而该大分子复合物亦包含如B1整合蛋白、淋巴细胞抗原CD4、CD8、CD19等的非四次跨膜蛋白分子。四次跨膜蛋白与特异蛋白伴侣结合，通过彼此之间的相互作用而相互联系，它们在一些细胞表面分子的相互联系及许多细胞功能的结合中有重要作用。

2000年Todd et al.等人克隆出该基因超家族的新成员——NET-x基因(x为1-7)，其产物约有200-300个氨基酸组成。这七个基因分子各有四个长度足以横跨细胞质膜的疏水区域，前两个跨膜结构域之间包含14-29个氨基酸，而第2、3个跨膜结构域之间的亲水部分十分短，仅有不超过5个氨基酸。该蛋白的跨膜结构域所定位的第二个细胞外区域的长度变化很大，但NET蛋白分子长度较稳定，如NET-6有68个氨基酸，而NET-2有109个氨基酸。所有NET在第二个细胞外区域至少有4个半胱氨酸(其中3个在保守位点)，全部NET在第三或第四个跨膜结构域中都包含带电残基，除NET-7外的其它NET的第一个跨膜结构域含有天冬氨酸。除了NET-2，其它NET在第一个跨膜结构域之后都含有保守的赖氨酸，而NET-2则由天冬氨酸替代赖氨酸。除了NET-2，其它NET都有胞外结构域的糖基化，而仅NET-4在第一个胞外区域含一功能区。NET-3与CD9有48％的一致性，NET-5与NAG-2有55％的一致性，而与CD53有41％的一致性，其它NET与已知的四次跨膜蛋白有12-25％不等的一致性。NET-1仅在上皮细胞中表达；NET-2基因含有8个外显子，5个内含子/外显子的交界在所有四次跨膜蛋白中均保守；NET-3具有表达的限制模式，它仅存在于A431、LoVo及造血细胞中；NET-4在所有T淋巴细胞中表达，而在大多数B淋巴细胞中不表达；NET-7缺乏5′端序列，但它仍足以编码一完整的四次跨膜蛋白。[Biochim Biophys Acta 2000 Mar16；1478(1)：159-63]

跨膜蛋白广泛分布于生物体各个组织细胞，在物质运输等方面具有十分重要的作用，近年研究表明它还与一些肿瘤细胞的转移抑制有关。若发生表达异常，将严重破坏细胞的正常生命活动及正常功能。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与四次跨膜蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为四次跨膜蛋白14.19。

由于如上所述四次跨膜蛋白14.19蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的四次跨膜蛋白14.19蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新四次跨膜蛋白14.19蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——四次跨膜蛋白14.19以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码四次跨膜蛋白14.19的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码四次跨膜蛋白14.19的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产四次跨膜蛋白14.19的方法。