[发明专利]一种新的多肽——人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

神经丝氨酸蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族，它是由中枢神经系统的轴突及外周神经系统神经元所分泌的分子量约为55Kda的糖蛋白，主要分布在神经系统中，在调节大脑发育及功能方面有重要功能。神经退化如阿尔茨海默氏病的发病机理与丝氨酸抑制剂及靶蛋白酶的失衡有关，α1-抗胰凝乳蛋白酶在老年斑中积累，其浓度在阿尔茨海默氏病患者的脑脊液中增加，与神经丝氨酸蛋白酶抑制剂在结构上有较大相似性的蛋白酶微管连接蛋白-1(PN-1)在阿尔茨海默氏病患者的脑脊液中含量下降，其它中枢神经系统的疾病与脑脊液的纤溶酶原催化抑制剂(PAI-1)的浓度有关。

1997年Schrimpf SP等人克隆出的新的人类神经丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(PI12)是丝氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的新成员，它位于3号染色体长臂的26区域，该基因的mRNA主要分布在人类大脑RNA中，长约1.8kb，其表达产物由410个氨基酸组成，其68-85号氨基酸主要是带负电的残基。该基因的5′端的UTR包含81个核苷酸，3′端的UTR含有248个核苷酸，其1535-1540位是一多聚腺苷酸信号(AATAAA)。该蛋白与鸡的丝氨酸蛋白酶抑制剂具有相似的开放阅读框，核酸的相似性为78％，氨基酸组成有80％相同。该蛋白产物高度保守，其开放阅读框(ORF)中仅一个氨基酸在人和鸡中不同，该ORF的Ala16/Thr17和Ala19/Thr20是主要切割位点，前16个氨基酸构成的蛋白质组成信号肽(Osterwalder et al.，1996)，而ORF的Thr17是该蛋白的氨基端。其活性中心环(RCL)为Gly332-Tyr351，与靶丝氨酸蛋白酶的催化中心反应的易断键为Arg-Met键。RCL的环区氨基酸与神经丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能特异性有重要关联。该蛋白可能起调节生长锥或突触的蛋白水解酶的作用。[Genomics 1997 Feb15；40(1)：55-62]

神经丝氨酸蛋白酶抑制剂主要分布于生物体大脑，与大脑的功能及发育密切相关，该蛋白功能的受损会导致大脑功能发育的延迟或限制，从而引起进行性老年痴呆症、智力发育迟缓等一系列大脑功能疾病。该蛋白与上述疾病的诊断及治疗也有关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌中，本发明的多肽的表达谱与人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27。

由于如上所述人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(PI12)83.27的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。