[发明专利]一种新的多肽——人泛素化蛋白稳定蛋白9.02和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——UbcH5蛋白9.02，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

依赖泛素的蛋白质水解系统是真核细胞低寿命异常蛋白质选择性降解的一个主要途径[Hershko，A.&Ciechanover，A.1992.Annu.Rev.Biochem.61,761-807]。在这些蛋白质降解之前，泛素会与靶蛋白共价结合，这是该降解途径的主要特点。泛素是一个有76个氨基酸残基并在真核生物中高度保守的蛋白质。泛素缀合物的形成需要三个家族蛋白的共同作用。它们分别是泛素激活酶E1，泛素缀合酶E2和作为泛素蛋白配基的一些其他蛋白E3s(可能在底物识别中起关键作用)。泛素首先通过在泛素C末端的甘氨酸残基和E1激活位点半胱氨酸残基形成硫酯来激活，E1催化这个需要ATP的激活作用。激活后的泛素被转移至E2的半胱氨酸残基，保留高能硫酯键。最后E2本身或与E3一起催化泛素C末端甘氨酸残基与靶蛋白上半胱氨酸残基的ε-氨基基团之间同等肽键的形成。E3s特异性结合在E2和泛素上将该复合物转运至靶蛋白。泛素化蛋白最后被多亚基蛋白酶复合物识别并降解。

尽管酵母的基因分析表明泛素的缀合作用是细胞生存所必须的[Seufert，W.&Jentsch，S.1

990.EMBO J.9,4535-4541]，但是只有很少的泛素系统的细胞靶子被确定，这些细胞靶子包括细胞周期蛋白B和酵母转录因子MATα2。另一个引人注目的细胞靶子是肿瘤抑制因子P53。人的癌症相关乳头硫病毒(HPV)16和18能使P53泛素化水解。体内研究表明HPV E6致癌基因蛋白结合在一个分子量为100kDa取名为E6-AP(E6相关蛋白)的蛋白质上。E6/E6-AP依赖泛素化作用需要一个能被A.thaliana UBC8代替同时又包含哺乳动物E2活性的蛋白质。给这个蛋白质取名为UBCH5，该蛋白质氨基酸序列与UBC8有很高的相似性。

UBCH5在调节人细胞泛素系统识别的蛋白质稳定性时起着非常重要的作用，但UBCH5并不是第一个类似于E2的蛋白质。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与UbcH5蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为UbcH5蛋白9.02。

由于如上所述UbcH5蛋白9.02蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的UbcH5蛋白9.02蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新UbcH5蛋白9.02蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——UbcH5蛋白9.02以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码UbcH5蛋白9.02的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码UbcH5蛋白9.02的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产UbcH5蛋白9.02的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——UbcH5蛋白9.02的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——UbcH5蛋白9.02的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与UbcH5蛋白9.02异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；