[发明专利]一种新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白11.99和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白11.99，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

是一种普遍存在的现象，发生在淋巴细胞、胸腺细胞、肝细胞、皮肤和胚胎发生细胞等多种依赖于激素的组织中。其是由蛋白酶和一些其它特殊蛋白的主动合成所造成的细胞自杀性死亡，是生物体正常发育的一部分。动物的大多数细胞在发育的一定阶段均会出现正常的自然死亡，其不同于一般的细胞坏死，是相关组织的生长、发育的重要自身调控机制，如在手足发育过程中，程序化细胞死亡导致指(趾)间组织的消失而使指(趾)相互分离；淋巴细胞的程序化死亡是确保免疫系统识别自己和异己成分的一个重要部分；脊髓动物中，70％以上的潜在成神经细胞在神经系统发育的特定阶段死亡等。近年的研究还表明，生物体内一些细胞无法进入程序性死亡，将导致相关组织肿瘤及癌症等恶性疾病的发生。因而，细胞的程序性死亡在各种组织及器官的生长发育过程中军起着重要的调节作用，是生物体内自身代谢调节的一种重要方式。

含有RNA识别结构域(RNA recognition motifs，RRMs)的蛋白参与RNA代谢许多方面，其中有些还在正常发育中必不可少。神经细胞瘤细胞凋亡相关RNA结合蛋白NAPOR(neuroblastoma apoptosis-related RNA binding protein)是一种ELAV类型的RNA结合蛋白，具有三个特征性的RNP2/RNP1类的RRM，是一类在神经细胞瘤凋亡过程中被诱导表达的基因。

mNapor是一类在小鼠中发现的NAPOR的小鼠mNapor蛋白。其开放阅读框架与NAPOR有98.5％的相同性，在3’-非翻译区也有80.1％的相同性。小鼠的mNapor定位于2号染色体的A2-A3位置，与人的NAPOR位置结合。原位杂交试验分析表明mNapor的表达谱与细胞凋亡的发生无论是在空间上还是在时间上都是一致的。表明了它在中枢神经系统发育过程中的作用。【Gene 1999 Sep3；237(1)：135-42】

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与小鼠mNapor蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人细胞凋亡相关蛋白11.99。

由于如上所述人细胞凋亡相关蛋白11.99蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人细胞凋亡相关蛋白11.99蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人细胞凋亡相关蛋白11.99蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人细胞凋亡相关蛋白11.99以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人细胞凋亡相关蛋白11.99的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人细胞凋亡相关蛋白11.99的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人细胞凋亡相关蛋白11.99的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人细胞凋亡相关蛋白11.99的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人细胞凋亡相关蛋白11.99的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人细胞凋亡相关蛋白11.99异常相关的疾病的方法。    

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；