[发明专利]一种新的多肽——柠檬酸合成酶30.80和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——柠檬酸合成酶30.80，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

有氧代谢过程中，葡萄糖的分解代谢并不停止在丙酮酸，也不是象厌氧发酵时由丙酮酸还原成乳酸或乙醇。反之，丙酮酸的碳原子在循环过程中彻底地被氧化成二氧化碳，此循环过程几乎是所有需氧生物的能量代谢的中心环节。在循环的一系列反应中，关键的中间物是柠檬酸，它有三个羧酸基，因此称三羧酸循环，又称柠檬酸循环。柠檬酸合成酶(citrate synthase，CS)是三羧酸循环的第一个酶，其功能是催化从草酰乙酸和乙酰辅酶A合成柠檬酸，该步反应是整个三羧酸循环的限速步骤(Srere，1969)。通常，真核生物的柠檬酸合成酶是由核基因编码的，在细胞质核糖体中合成，然后被转运到线粒体基质中，其成熟形式即贮存在此。

人类柠檬酸合成酶的全长cDNA包含了一条含有466个氨基酸残基的蛋白，与猪的柠檬酸合成酶(含有464个氨基酸残基)相比较，有95.3％的同源性(Evanset al.，1988)，其分子量为51.67Kd(不包含其前端的27个氨基酸前导序列)。序列中含有5个保守的Cys残基，人的柠檬酸合成酶蛋白序列中Gly、Ser、Val的含量略高于猪。27个氨基酸的前导序列也是高度保守的，它是疏水性的α螺旋结构。人、猪和酵母柠檬酸合成酶的N末端都含有保守的L-X-A-R-H-X-S序列，另外在339-358位置处有一段20个氨基酸残基的序列，能够通过主多肽链的一些疏水键结合辅酶A的腺嘌呤环(Remington et al.，1982)。其H262、H265、H301、H347、R356以及D402处的保守残基对于该酶的催化功能起着非常重要的作用。

大量的对于线粒体功能的研究都是以测量柠檬酸合成酶的活性作为重要依据的，从而能够得出线粒体数量的整体标准。但是，柠檬酸合成酶的浓度以及它的调节功能在不同的线粒体蛋白中通常是不同的(Marin-Garcia et al.，1988)。

实验证明，真核生物的柠檬酸合成酶能够因为一些刺激反应而发生改变，这些刺激包括运动刺激、神经刺激以及荷尔蒙刺激等(Holloszy et al.，1970；Seedorf et al.，1986；Williams et al.，1986；Kraus et al.，1988；Annex etal.，1991)。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与柠檬酸合成酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为柠檬酸合成酶30.80。

由于如上所述柠檬酸合成酶30.80蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的柠檬酸合成酶30.80蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新柠檬酸合成酶30.80蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——柠檬酸合成酶30.80以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码柠檬酸合成酶30.80的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码柠檬酸合成酶30.80的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产柠檬酸合成酶30.80的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——柠檬酸合成酶30.80的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——柠檬酸合成酶30.80的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与柠檬酸合成酶30.80异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。