[发明专利]一种新的多肽——真核生物释放因子110.67和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——真核生物释放因子110.67，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

无论原核生物还是真核生物都有三种终止密码子UAG、UAA和UGA。没有一个tRAN能够与终止密码子作用，而是由特殊的蛋白质因子促成终止作用。这类蛋白质因子叫做释放因子。原核生物有三种释放因子：RF1识别UAA和UAG；RF2识别UGA和UAA；RF

3能够刺激RF1和RF2的活性。在真核生物中，只有一种释放因子eRF。ERF需要GTF与之结合才能结合于核糖体，GTP可能在终止反应后被水解，这一作用可能与eRF与核糖体的解离有关[Caskey，C.T.1980.Trends Biochem.Sci.5，234-237]。

不管原核生物还是真核生物，释放因子都是作用于A位点，并且需要P位被肽基-tRNA所占据。这个过程同样需要肽基的转移以及把空载的RNA逐出核糖体。肽基的转移仍然是由肽基转移酶活性起作用的，只不过由于释放因子的某种作用使肽基转移到水分子上因而并不形成新的肽键。核糖体是如何从mRNA上释放下来的，现在还不清楚，可能是释放因子触发了核糖体构象的改变，并有可能涉及到未知的蛋白质因子。

早在20年前就有报道，在高等生物中有一种释放因子在体内GTP依赖终止实验中能够识别所有的无义密码子[Konecki，D.S.，Aune，K.C.，Tate，W.andCaskey.C.T.1977.J.Biol.Chem.

252，4514-4520]。这一类释放因子从而组成了一个高度保守的蛋白质家族，真核生物释放因子1(eRF1)。人的释放因子家族包括4个成员，其基因分别位于人染色体5，6，7和X上，但可能只有染色体5上的这个释放因子基因是有功能的，其他的基因可能是eRF1基因外显子序列的非功能拷贝。染色体5上的eRF1基因全长大约40kb，包含11个外显子和10个内含子，其中第一个外显子是不翻译的。一个非常长的内含子(23582bp)位于第2和第3个内含子之间。ATG的上游一个1100bp序列缺少重复元素但包含一个可能的调节元素。另一个区域，2900bp长，位于外显子2的下游区域对应于大内含子最接近的部分，同样也缺少重复元素但可能是重要的转录调节元素：包含启动子序列，不含有TATA盒，这是持家基因的主要特征。

实验表明，eRF1基因是大多数细胞功能所必须的。eRF1在真核生物的蛋白质合成终止中所起的作用非常重要，其基因表达失常将会给蛋白质的合成带来意想不到的结果。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与真核生物释放因子1的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为真核生物释放因子110.67。

由于如上所述真核生物释放因子110.67蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的真核生物释放因子110.67蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新真核生物释放因子110.67蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——真核生物释放因子110.67以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码真核生物释放因子110.67的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码真核生物释放因子110.67的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产真核生物释放因子110.67的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——真核生物释放因子110.67的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——真核生物释放因子110.67的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。