[发明专利]一种新的多肽——人P53结合蛋白14.63和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人P53结合蛋白14.63，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

原蛋白在转化细胞中大量表达，在一些增殖的非转化细胞中也发现有该蛋白的表达，但其表达量明显低于前者。研究发现，在一些肿瘤及癌症细胞中存在大量该蛋白的突变体。P53被认为是一种肿瘤抑制因子，但并不是对所有的肿瘤。对一些肿瘤，P53不具有抑制作用，甚至还具有相反的副作用，如：卵巢肿瘤。在生物体内，P53主要涉及各种细胞周期调控过程，其可能作为一种反式激活蛋白，通过调节细胞周期所需的一系列基因的表达来反向调节细胞的分裂。

细胞周期循环涉及一系列的过程，不同的阶段由各种不同的调节因子通过正调控或负调控来共同完成。P53蛋白就是其中的一种非常常见的负调节因子。P53蛋白的突变，或其与DNA肿瘤病毒原癌基因产物的相互作用将导致癌症的发生[Leine A.J.，Momand J.et al.，1991，Nature，351：453-456]。由上可知，P53在生物体内有着十分重要的作用，其通过调控细胞周期的各种中间调节物的表达来调节细胞的分裂与分化。而P53在体内的作用活性还需P53结合蛋白的协同作用，P53蛋白与相应的P53结合蛋白结合，并调控体内相关细胞的分裂和分化。该蛋白及其结合蛋白的突变或表达异常通常与生物体内的各种发育紊乱症、各种肿瘤及癌症等疾病的发生相关。

1996年，Louie等人又从人中克隆得到了一新的P53结合蛋白。该蛋白的氨基酸序列中含有两个保守的序列片段，SH3结合结构域及P53结合结构域。其中P53结合结构域是蛋白与P53结合并协同作用的重要活性中心。该蛋白在生物体内与P53蛋白结合，在细胞周期过程中调控着细胞的分裂与分化。其突变或表达异常将导致P53蛋白的作用异常，进而影响体内相关代谢途径的进行[LouieNaumovski，Michael L.Cleary et al.，1996，MoleCular and CellularBiology，16(7)：3884-3892]。该蛋白在生物体内通常与多种发育紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种疾病。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人P53结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人P53结合蛋白14.63。

由于如上所述人P53结合蛋白14.63蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人P53结合蛋白14.63蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人P53结合蛋白14.63蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人P53结合蛋白14.63以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人P53结合蛋白14.63的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人P53结合蛋白14.63的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人P53结合蛋白14.63的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人P53结合蛋白14.63的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人P53结合蛋白14.63的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人P53结合蛋白14.63异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：