[发明专利]一种新的多肽——人谷氨酸转运子9.02和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人谷氨酸转运子9.02，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

谷氨酸是主要的大脑神经传递素，它在学习、记忆等复杂的生理过程中有重要作用，但胞外谷氨酸浓度升高到一定程度会导致神经细胞的死亡，引起局部缺血症、神经退化等疾病。谷氨酸的吸收可被THA、L-CS等抑制。谷氨酸转运子能快速从胞间连结处转运谷氨酸，防止胞外谷氨酸浓度的升高。谷氨酸转运子在神经退化等疾病的发作过程中起十分重要的作用。

1994年Kawakami H等人克隆出人谷氨酸转运子(hGluT-1)的cDNA，它编码542个氨基酸组成的、分子量为59569Da1的蛋白质，与脑中同属蛋白高度同源。其3′端非编码区域有两个典型的多聚腺苷酸信号序列，并以一多聚腺苷酸结尾。该蛋白的跨膜α-螺旋结构域由6个疏水片段组成，其中3个片段在天冬酰胺-35、天冬酰胺-206、天冬酰胺-216被糖基化。谷氨酸转运子转运活性的表达与谷氨酸密切相关，同时也依赖于胞外Na⁼浓度。人G1uT-1与鼠GluT-1高度同源，但它比鼠GluT-1少一个氨基酸，与Na⁺/Cl^-依赖性的GABA、L-glycine、dopamine、serotonin的神经传递转运子没有同源性。人谷氨酸转运子主要分布在大脑中，心脏、肺、骨骼肌、胎盘中也存在一定量，肝脏和肾脏中仅有极微量。[BiochemBiophys Res Commun 1994 Feb 28；199(1)：171-6]

谷氨酸转运子分布于生物体各组织器官，与谷氨酸的转运密切相关，可抑制神经退化、局部缺血症等疾病的发生，在药理学研究上有很大用途。正常表达时对人体必要，但若表达过量会引起各种疾病，严重危害人类的正常生命活动及生理功能。此外，它在神经系统相关疾病的诊断及治疗中亦有一定作用。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌中，本发明的多肽的表达谱与人谷氨酸转运子的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人谷氨酸转运子9.02。

由于如上所述人谷氨酸转运子9.02蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人谷氨酸转运子9.02蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人谷氨酸转运子9.02蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人谷氨酸转运子9.02以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人谷氨酸转运子9.02的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人谷氨酸转运子9.02的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。 

本发明的另一个目的是提供生产人谷氨酸转运子9.02的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人谷氨酸转运子9.02的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人谷氨酸转运子9.02的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人谷氨酸转运子9.02异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。