[发明专利]一种新的多肽——网格蛋白轻链49.5和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——网格蛋白轻链49.5，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞摄取物质的内活动机制主要有两种：吞噬作用(即“细胞吞食”)，通常消化较大颗粒(直径＞0.5.mu.m)，胞饮作用(“细胞饮用”)，小泡中摄入较小的颗粒(直径＜0.2.mu.m)。胞饮作用最常发生在细胞膜被称为网格蛋白-包被的凹洞的特定位点。网格蛋白因其具有三只脚的外形而被称为三脚蛋白复合体。网格蛋白包被的小泡介导自一个细胞膜到另一个细胞膜的受体选择性运输。它们有助于受体介导的内吞作用以及反-高尔基体网络中的分拣蛋白。在溶液中，网格蛋白三脚蛋白体自我装配形成被称为“笼形”的封闭式多面结构。在质膜中，网格蛋白的多面体装配形成因为吞入源自胞外环境物质而在弯曲部分增加的包被的凹洞。

网格蛋白是一种主要的膜形成蛋白，它把类似包膜凹孔的泡囊裹住，并形成参与整合生物中膜交通的细胞表面碎片。网格蛋白的外膜(被称为三角蛋白复合体)由三条重链(180Kd)及三条轻链构成(23至27Kd)。网格蛋白的重链为网格提供结构框架，形成三支结构，而轻链跨越每一支的内部片段并能够与其他胞质蛋白相互作用。包被网格蛋白小泡的形成要求三脚蛋白复合体的聚合至位于细胞膜胞质一侧的多面体网络。网格蛋白的装配通过其与连接物分子作用选择性诱捕受体，最终在出芽的膜泡周围形成球状包被。再出芽之后，网格蛋白解装配，释放出小泡去与目标膜融合。在不同细胞内膜上调整网格蛋白的时间以及位点，从细胞内池中补充网格蛋白亚基以及控制网格蛋白解装配需要多分子信号。网格蛋白的轻链介导这些调控机制，它可能有助于正确定向装配及分解网格蛋白外膜，非共价结合于重链，它们还结合钙并与非包被的ATP酶hsc70相互作用。在较高等的真核生物中，两种基因编码不同但相关，同源度为60％的轻链：LC(a)及LC(b)。这两种基因都能通过组织特异性可变剪接而产生两种不同的形式，两种形式因分别插入30或18个残基的序列而不同。网格蛋白轻链自N端至C端线性排列6个功能域：磷酸化定向序列；hsc70结合序列；EF-手形钙结合序列；7肽的重复序列，结构为卷曲螺旋型α螺旋；神经元特异插入序列；具可变半胱氨酸的C-端区域。在网格蛋白轻链的N-末端部分有一个在LC(a)及LC(b)完全保守的21个残基的区域，呈酸性。在酵母中有一条序列与较高等生物的轻链只是约略相关的单一轻链(基因为CLCl)。我们开发了网格蛋白轻链的两条特征序列膜板。第一条是来自真核生物轻链的保守N-末端区域中心的7个氨基酸肽段，所有较高等的真核生物的轻链中的保守序列：F-L-A-Q-Q-E-S；第二条衍生自位于所有已知网格蛋白轻链C-末端的带正电区域，所有生物中的保守序列：[KR]-D-x-S-[KR]-[LIVM]-[KR]-x-[LIVM](3)-x-L-K。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与网格蛋白轻链的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为网格蛋白轻链49.5。

由于如上所述网格蛋白轻链49.5蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的网格蛋白轻链49.5蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新网格蛋白轻链49.5蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——网格蛋白轻链49.5以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码网格蛋白轻链49.5的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码网格蛋白轻链49.5的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产网格蛋白轻链49.5的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——网格蛋白轻链49.5的抗体。