[发明专利]一种新的多肽——糖基水解酶33.55和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——糖基水解酶33.55，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

纤维素和木聚糖的微生物降解需要一些酶，如葡聚糖内切酶、纤维二糖水解酶或木聚糖酶。真菌和细菌能够产生一种纤维素酶和木聚糖酶，基于这些酶在序列上的共同点以及差异性，可归类为不同的家族，其中有一个家族称为糖基水解酶家族9(或称纤维素酶家族E)。

糖基水解酶家族9中有两个最为保守的氨基酸序列：(1)[STV]-X-[LIVMFY]-[STV]-X(2)-G-X-[NKR]-X(4)-[PLIVM]-H-X-R；(2)[FYW]-X-D-X(4)-[FYW-X(3)-E-X-[STA]-X(3)-N-[STA]。其中(1)中的His是活性部位的重要残基，(2)中的Asp和Glu是水解过程中起催化作用的重要残基。

糖基水解酶家族9存在于许多细菌和真菌中，从而引起某些感染性疾病，与一些呼吸道和肠道疾病也有非常密切的关系。在哺乳动物的肠道和呼吸道中发现一种呼肠孤病毒，其表面的σ蛋白含有糖基水解酶活性，含有Asp和Glu两个氨基酸残基，属于糖基水解酶家族9。这种病毒能附着到了寄主细胞(呼吸道肠道上皮细胞)表面，利用糖基水解酶溶解覆盖在上皮细胞上的黏液层，引起呼吸道肠道感染。

糖基水解酶活性的表达受诸多因素的影响，在大多数生物体中高的碳源代谢产生高浓度的葡萄糖，会抑制糖基水解酶的降解作用；另外，一些mRNA的转录产物也能调节糖基水解酶的合成。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与糖基水解酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为糖基水解酶33.55。

由于如上所述糖基水解酶33.55蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的糖基水解酶33.55蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新糖基水解酶33.55蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——糖基水解酶33.55以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码糖基水解酶33.55的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码糖基水解酶33.55的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产糖基水解酶33.55的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——糖基水解酶33.55的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——糖基水解酶33.55的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与糖基水解酶33.55异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中72-989位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1180位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。