[发明专利]白藜芦醇和白藜芦醇甙分离方法及其应用

说明书

本发明涉及白藜芦醇和白藜芦醇甙的分离方法及其应用，特别是涉及从中药虎杖根茎分离白藜芦醇和白藜芦醇甙的方法和白藜芦醇和白藜芦醇甙作为保健品或食品、饮料、保健添加剂的应用。

早已有人发现，心血管疾病的发生与红葡萄酒的消费量呈负相关。经研究发现(E.H.Siemann and L.L.Creasy：Am.J.Enol.Vitic.43：49-50，1992)，红葡萄酒中对心血管起保护作用的生理活性物质是其中所含的白藜芦醇(Resveratrol)和白藜芦醇甙(Polydatin或Piceid)。还有研究发现，这类化合物还具有防止血栓形成、保护肝脏、抗氧化、清除自由基、抗炎症、抗某些真菌和细菌及抗癌等功效(余传林等，中药药理与临床，1994，10(2)：33；单春文，药学学报，1988，23(5)：394；久保道德等，国外医学药学分册，1982：3；Meishiang J et al.Science 1997，Vol 275：218-220)。但目前获得白藜芦醇及其甙主要是化学合成方法，存在着工艺复杂、成本高等问题。

虎杖(Polygonum Caspidatum Sieb et Zace)是我国传统中草药，含有较丰富的(含量随产地不同而异)白藜芦醇和白藜芦醇甙。虎杖目前主要用来治疗关节痹痛、湿热黄疸、闭经、咳嗽多痰、水火烫伤、跌扑跌伤、痈肿疮毒等。虎杖的成份非常复杂，还含有蒽醌类化合物、黄酮类化合物、萘醌、多糖、氨基酸、微量元素、脂肪酸等多种物质。因此，从虎杖中分离并提纯白藜芦醇及白藜芦醇甙具有较大的难度。从虎杖中提取白藜芦醇及白藜芦醇甙仅见于日本专利昭60-9455(1985)，该专利公开的方法提取工艺繁杂，而且使用了危险性较大的乙醚作为溶剂。尤其是，用该专利方法仅能得到含有白藜芦醇和白藜芦醇甙混合物的终产物，纯度较低。

本发明旨在从虎杖中提取白藜芦醇及白藜芦醇甙，提供一种工艺简便、快速、易操作、纯度高、成本低并能大规模生产的分离及提纯方法，本发明的另一目的是将白藜芦醇和白藜芦醇甙作为药品、保健品或食品、饮料、保健添加剂的应用。

以下是本发明的具体内容：

1、提取

将干燥虎杖根茎粉碎后，用可与水混溶的有机溶剂提取2次，每次提取溶剂用量为药粉重量的5倍，合并提取液，减压蒸馏浓缩至原提取液体积的1/20。所得浓缩物中再加入该浓缩物体积1-2倍的水，用碱性物质调pH至7.5-8.0。再分别用5倍和4倍体积的乙酸乙酯萃取二次，合并两次萃取液，减压蒸馏浓缩至萃取液体积的1/15-1/20，最后所得的浓缩物是粗提物，作为进一步纯化的原料。

所述与水混溶的有机溶剂系指：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮以及这些溶剂任意的组合。

2、分离纯化

用柱层析法和结晶法进行分离及纯化，白藜芦醇及其甙以收集柱层析洗脱液的先后顺序不同而分离，先收集的洗脱组分中含有白藜芦醇，后收集的洗脱组分中含有白藜芦醇甙。层析柱填充物是硅胶，层析洗脱液为氯仿∶甲醇(乙醇)＝4～8∶1或乙酸乙酯∶乙醇＝90～100∶0～10。

将第一次柱层析中收集到白藜芦醇甙洗脱组分浓缩后在室温下静置，析出结晶，用甲醇—氯仿(1∶8～10)重结晶，可得到纯度高达97％以上的结晶。

白藜芦醇需经二次硅胶柱层析。将第一次柱层析中首先收集到白藜芦醇洗脱组份浓缩，作为第二次硅胶柱层析的上样原料进行再次层析，层析洗脱液为三氯甲烷∶乙酸乙酯＝70～100∶20～30，将二次洗脱液浓缩、室温下静置，析出白藜芦醇结晶，用丙酮-氯仿(1∶8～10)重结晶，也得到纯度高达97％以上的结晶。

以上各操作中的溶剂、洗脱剂回收容易，并可反复使用，从而降低了成本。

各次重结晶后的母液均可留待与下次虎杖粉提取液合并后，再次分离纯化用。

3、制剂

将白藜芦醇甙或白藜芦醇或两者混合物与食品或药品上可接受的辅剂、赋形剂混合后，用适当工艺制成各种剂型，如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、溶液剂、油膏剂、霜剂等，作为药品、保健品、化妆品等。也可以作为食品添加剂加入食品、饮料、制成各种形式的保健食品、饮料、酒类。

本发明提供的分离纯化方法工艺简便、操作容易、安全，成本低廉，便于大规模生产，所得产物纯度高。

以下实施例进一步对本发明进行详述，使有助于理解本发明内容。实施例1

1、提取