[发明专利]减毒的猪生殖及呼吸综合症病毒株及其应用方法

说明书

本发明涉及一株新的猪生殖与呼吸综合症(PRRS)病毒的发现、分离、鉴定和用途。本发明还涉及猪PRRS疾病的诊断与保护性抗原和疫苗，以及其制备和应用的方法。

本文所有的公开物和专利申请，均作为参考文献引用，就象每个公开物和专利申请具体和单独指明的那样是作为参考文献而引用。

最早描述猪生殖及呼吸综合症(PRRS)的是美国(1987年)和德国(1990年)。后来报道这种疾病的其它一些国家包括：法国(1)，丹麦(2)，荷兰(3)，日本(4)，加拿大(5)，西班牙(6)，英格兰(7)。PRRS可能对美国和欧洲的猪饲养者造成经济灾难。有证据表明，美国和欧洲分离株具有很大的遗传性和抗原性差别(29)。

这种综合症已有各种不同的称呼，如：神秘的猪病，猪不育和呼吸综合症(SIRS)，青紫流产胎，蓝耳猪病，“Lelystad病毒”，“Heko-heko”疾病，猪流行性流产和呼吸综合症(PEARS)(8-10)。

由PRRS病毒引起的疾病可由以下一些特征进行鉴定：大母猪严重的生育失败，导致木乃伊化，死产和衰弱猪的发生率增加的晚期流产；发情期恢复延迟的慢性病，轻微到严重的呼吸不畅，包括打喷嚏，咳嗽以及幼猪鼻眼流出物；断奶前、断奶及生长中的猪死亡率增加；成长猪到成熟猪中一种轻微的类似流感的疾病；结膜炎及淋巴结增大(11-13)。呼吸综合症常常与一些继发性细菌病原体的严重感染相关，包括出血败血性巴斯德氏菌，副猪嗜血杆菌及猪链球菌(8)。实验性接种小猪，显示出一些临床病症，如抑郁症，厌食，发热，腹泻，坐姿，眼周浮肿(12)，有研究估计，在91个荷兰饲养场中由于PRRS引起的经济损失是每年每头母猪平均29.5kg，这是由于每头母猪每窝生产的小猪数量减少，延长了产小猪的间隔期并加快了大母猪更换率(3)。

与这种疾病相关的病毒是一种有包膜的RNA病毒，属于披膜病毒科的动脉炎病毒属。有关的形态学，形态发生和病毒组成的资料首先提示，PRRS病毒属于动脉炎病毒属。通过分析基因组构成及基因表达策略，并比较推断的蛋白质序列，可以证实该结论。这些动脉炎病毒也包括马动脉炎病毒(EAV)，乳酸脱氢酶升高病毒(LDV)和猿猴出血热病毒(SHFV)。PRRS病毒属于单链RNA病毒，具有正极性的病毒基因组，其大小约为15kb(15)。据估计这些球形病毒粒子直径为48～83nm，含有被包膜包围的25～30nm的核心(3)。正链RNA基因组至少个有三种主要的结构蛋白，称其为N，M和E。其中N蛋白被认为是核衣壳的主要成分，而M和E是膜相关蛋白(16)。已经测定了来自重叠cDNA克隆的分离株CDI-NL-2.91(巴斯德研究所保藏号I-1102)的PRRS病毒的基因组RNA的核苷酸序列(17)，在该分离株得到的15088bp连续序列中已鉴定了八个开发读框(ORFs)。另一株美国分离株ATCC VR 2332的基因组3’一部分也已经克隆并测序(18)，所得的3358个核苷酸含有6个ORF，与PRRS病毒的欧洲株的第2到7个ORFs和动脉炎病毒属中的其它成员有同源性。

如前面所述，有证据显示，PRRS病毒的不同分离株之间的遗传性和抗原性差异很大。因此，有必要分离、鉴定并应用新的PRRS病毒分离株。在本文中，我们报道了命名为JK-100的一种新的PRRS病毒株的发现、分离和用途。

本发明包括取自受感染猪群中选定小猪的PRRS病毒株的鉴定和分离，所选用的小猪显示出病毒血症和血清转变的迹象，但还没有临床症状。更具体地说，我们已经鉴定并分离了一株命名为JK-100的新的PRRS病毒株。

这种命名为JK-100的PRRS病毒株按国际承认的用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约，于2000年8月8日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC V200005。

本发明也提供了基本上相应于JK-100株的PRRS病毒株。术语“基本上相应于”指的是JK-100的自发变异和人工变异株，特别是那些可由以下技术检测的变异株，如杂交，PCR和用JK-100特异性材料如JK-100特异性抗体的ELISA。

本发明提供了在某种细胞系如MARC145细胞系中高效价繁殖JK-100株的方法。本发明提供了包括JK-100株的物质组合物。更具体地说，本发明提供了包含活的、灭活的或减毒的JK-100病毒的物质组合物。