[发明专利]一种新的多肽——人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

异柠檬酸裂解酶(Beeching J.R.，1989；Atomi H.，Ueda M.et al.，1990)是一种催化异柠檬酸盐转变为琥珀盐和乙醛酸的酶。该过程是乙醛酸循环的第一个步骤，乙醛酸循环途径存在于细菌、真菌和植物中，是三羧酸循环(TCA)的一种变异形式。

乙醛酸循环是代表了另外一个途径，开始也是形成柠檬酸，但结果是达到四肽水平的合成代谢，而不是一肽水平的分解代谢。乙醛酸循环有效地避开了TCA循环中释放CO₂的两个步骤，另外在每一轮中有2个分子的乙酰-CoA参加，而不是象TCA循环中只有一个，净结果是将每2个分子是乙酰-CoA转变成1个四碳化合物即琥珀酸。乙醛酸反映特有的两个反应是负责乙醛酸的生成及其随后的利用，其中异柠檬酸裂解酶将异柠檬酸分裂成2个分子，而不是象TCA循环中那样进行氧化脱羧作用。异柠檬酸裂解酶的产物是乙醛酸和琥珀酸，它们分别为二碳和四碳化合物。异柠檬酸裂解酶仅仅存在于二碳水平上进行净增长(由此而合成含碳数较高的化合物)的生物中。

研究发现，一个Cys、一个His和一个Glu或者Asp对于异柠檬酸裂解酶的催化活性非常重要。在真菌、细菌和植物的异柠檬酸裂解酶中，只存在一个Cys残基是保守的，它位于一个保守的六肽中间。保守的Cys残基及其附近氨基酸序列如下：K-[KR]-C-G-H-[LMQ]。

异柠檬酸裂解酶的存在与许多疾病相关，它存在于病菌中，能够导致许多病菌感染引起的疾病。因此，对异柠檬酸裂解酶的研究对于一些感染性疾病的治疗相当重要。

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽与上述的异柠檬酸裂解酶结构相似，并且包含了异柠檬酸裂解酶特征性的保守序列，因此认为此蛋白是一种新的异柠檬酸裂解酶蛋白，具有与之相似的生物学功能，并命名为人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24。

由于如上所述人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人异柠檬酸裂解相关蛋白9.24异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中233-487位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2070位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。