[发明专利]一种新的多肽——含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

如果倒数第二个氨基酸是小的和不带电的，蛋氨酸氨肽酶(MAP)负责来自初生的胞液和胞浆的原核蛋白的氨基末端(启始区)的蛋氨酸转移。所有研究过的MAP都是单体蛋白，它需要共价的钴离子才有活性。

实验表明，MAP的cDNA含有2569nt的序列，它的开放阅读框架位于nt1-nt1439，编码478个氨基酸，分子量为52832Da。它没有聚酰胺信号，此cDNA的5′末端位于3′未翻译区域。

已经知道MAP酶存在两个亚家族(Arfin S.M.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92：7714-7718(1995)；Keeling P.J.，Trends Biochem.Sci.21：285-286(1996))，从进化角度分析，在大肠杆菌的结合钴的MAP中，它们只有很少量的序列的相似性。

第一个家族由原核生物和真核生物的MAP-1组成，而第二个家族由古细菌的MAP和真核生物的MAP-2组成。第二个亚家族也包括一些不是MAP的蛋白但它们有明显的进化相联系，比如鼠的增殖相关蛋白1和分裂的酵母弯曲的DNA结合蛋白。对于每一个家族，我们发现了一个含有与钴结合的残基的特别的特征序列：

第一个家族的所有MAP的保守序列：[MFY]-x-G-H-G-[LIVMC]-[GSH]-x(3)-H-x(4)-[LIVM]-x-[HN]-[YWV][H是一个钴配体]

第二个家族的所有MAP的保守序列：[DA]-[LIVMY]-x-K-[LIVM]-D-x-G-x-[HQ]-[LIVM]-[DNS]-G-x(3)-[DN][第二个D和最后的D/N是钴配体]

实验表明，第二个家族跨越真核和原核生物，人的MAP-1型同时也可能存在。

如果MAP表达异常或突变，将影响到蛋白质的翻转，蛋白质功能的调节，对细胞中的靶信号的识别，从而会引起肿瘤或新陈代谢的异常。

本发明的多肽的蛋白序列包含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白的保守序列，因此认为是一种新的蛋氨酸氨肽酶蛋白，具有类似的生物学功能，故命名为含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24。

由于如上所述含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与含有蛋氨酸氨肽酶特征的蛋白9.24异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中432-686位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1501位的序列。