[发明专利]一种新的多肽——氮源调节蛋白P－II－8.8和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——氮源调节蛋白P-II-8.8，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

氮源调节蛋白P-II是一种细菌蛋白，对于Glu合成酶的控制起着非常重要的作用(Magasanik B.，1989；Holtel A.，Merrick M.，1988；Cheah E.，Carr P.D.，1994)。在氮源限制的情况下，当Glu转化为2-酮戊二酸盐的效率降低时，P-II的一个Tyr残基尿苷酸化，形成P-II-UMP。P-II-UMP引起Glu合成酶(GS)的脱腺苷化，因此使酶活化。相反，在氮源过剩的时候，P-II-UMP脱去尿苷酸，促进GS的腺苷酸化。P-II也能够通过阻止NR-II(ntrB)转化成为磷酸化NR-I(ntrC)，间接控制GS基因的转录(glnA)，NR-I是glnA的转录活化因子。一旦P-II发生尿苷酸化，整个反应过程就向着逆方向进行。

P-II蛋白约含有110个氨基酸残基，序列非常保守。发生尿苷酸化的Tyr残基位于蛋白的中间部位。在蓝细菌中，P-II在Ser残基上发生磷酸化，而不是尿苷酸化。

在甲烷原始细菌中，固氮酶铁蛋白基因(nifH)有两个开放阅读框，与真细菌P-II蛋白高度相似(Sibold L.，Henriquet M.et al.，1991)。这些蛋白可能涉及氮源固定的调节。

P-II蛋白最为保守的序列为包含了尿苷酸化的Tyr残基的6个残基：Y-[KR]-G-[AS]-[AE]-Y，第二个Y即为尿苷酸化残基。另外的保守区域为：[ST]-x(3)-G-[DY]-G-[KR]-[IV]-[FW]-[LIYM]-x(2)-[LIVM]。

P-II通过ntr系统的介导，在转录的控制中也起着较为重要的作用(Bueno etal.，1985)。当氮源受到限制时，活化器蛋白NtrC发生磷酸化，ntr调节的基因表现转录活性；相反，当氮源过量时，NtrC发生脱磷酸化，并且基因转录失活。

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽与上述的氮源调节蛋白P-II相似，并且包含了氮源调节蛋白P-II特征性的保守序列，因此认为此蛋白是一种新的氮源调节蛋白，具有与之相似的生物学功能，并命名为氮源调节蛋白P-II-8.8。

由于如上所述氮源调节蛋白P-II-8.8蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的氮源调节蛋白P-II-8.8蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新氮源调节蛋白P-II-8.8蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——氮源调节蛋白P-II-8.8以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码氮源调节蛋白P-II-8.8的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码氮源调节蛋白P-II-8.8的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产氮源调节蛋白P-II-8.8的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——氮源调节蛋白P-II-8.8的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——氮源调节蛋白P-II-8.8的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与氮源调节蛋白P-II-8.8异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中250-492位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1366位的序列。