[发明专利]一种新的多肽——人拓扑异构酶9.35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人拓扑异构酶9.35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在生物体内DNA通常以超螺旋形式存在，超螺旋又分为正超螺旋与负超螺旋两种。所有的DNA超螺旋均由DNA拓扑异构酶催化产生，在许多真核生物体内均发现存在各种拓扑异构酶。DNA拓扑异构酶可分为两类：一类叫拓扑异构酶I，一类叫拓扑异构酶II。拓扑异构酶I主要负责催化DNA链的断裂和重新连接，每次只作用于一条链，即催化瞬时的单链的断裂和连接，不需能量辅因子如ATP或NAD的协同作用。拓扑异构酶II可同时断裂并连接双股DNA链，其通常需要能量辅因子ATP的协同作用。生物体通过拓扑异构酶I和拓扑异构酶II的相反作用而使DNA负超螺旋达到一稳定的状态，并催化DNA复制的正常进行。研究发现，DNA超螺旋增高，将导致细胞生活能力的降低，进而影响机体的正常生长发育。由此可见，该两种蛋白酶在生物体遗传物质稳定及作用过程中起着极为重要的作用。

人们已从多种不同的真核生物体内拓扑异构酶I和拓扑异构酶II分子，并多这些蛋白的结构及功能进行了详细的研究。1988年，Peter等人又从人中克隆得到了一新的拓扑异构酶I蛋白。该蛋白与酵母及其它生物体内的拓扑异构酶I相似，其与体内拓扑异构酶II协同作用以催化体内DNA的负超螺旋形式及遗传物质的转录与表达。研究发现，该蛋白的突变或表达异常将直接影响体内遗传物质的存在形式、重组及相关细胞的生活能力，进而引发各种相关的疾病[Peter D’Arpa，Paula S.Machlin et al.，1988，Proc Natl Acad Sci USA，85：2543-2547]。

由上可知，拓扑异构酶I在维持遗传物质的存在及其作用过程中起着重要的调节作用，该蛋白的突变或表达异常将直接影响体内遗传物质的存在形式及其作用活性，进而降低相关细胞的生活能力及其相关的生物学活性的表达。该蛋白在生物体内通常与一些相关组织的发育及代谢紊乱性疾病、免疫系统疾病及一些相关组织的恶性疾病等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人拓扑异构酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人拓扑异构酶9.35。

由于如上所述人拓扑异构酶9.35蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人拓扑异构酶9.35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人拓扑异构酶9.35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人拓扑异构酶9.35以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人拓扑异构酶9.35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人拓扑异构酶9.35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人拓扑异构酶9.35的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人拓扑异构酶9.35的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人拓扑异构酶9.35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人拓扑异构酶9.35异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。