[发明专利]一种新的多肽——含锌的醇脱氢酶以及促皮质激素释放因子蛋白10.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——含锌的醇脱氢酶以及促皮质激素释放因子蛋白10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

醇脱氢酶(ADH)催化乙醇可逆氧化为乙醛并伴随有NAD的还原(Branden C.-I.，Joernvall H.，Eklund H.，Furugren B.，(In)The Enzymes(3rd edition)11：104-190(1975))。已知有三种结构以及催化上类型不同的醇脱氢酶：含锌的长链醇脱氢酶；昆虫型的短链醇脱氢酶；含铁的醇脱氢酶。含锌的ADH是二聚体或四聚体酶，每个亚基结合两个锌原子。其中一个锌原子对于催化活性是至关重要的，而另一个则不。两个锌原子都由半胱氨酸或是组氨酸残基配位，催化的锌原子由两个半胱氨酸以及一个组氨酸配位。含锌的ADH存在于细菌，哺乳动物，植物以及真菌中。在多数物种中，有超过一种的同功酶(例如人体中至少有六种，酵母中有三种等)。一些其他的锌依赖的脱氢酶与锌ADH密切相关，例如木糖醇脱氢酶(D-木酮糖还原酶)，山梨糖醇脱氢酶，芳香醇脱氢酶等。该家族还包括NADP-依赖的醌氧化还原酶，一种存在于细菌中的酶(qor基因)。在酵母以及哺乳动物中，这种酶作为一种眼睛晶状体蛋白补充，并被称为zeta-晶体蛋白(Joernvall H.，Persson B.，Du Bois G.，Lavers G.C.，Chen J.H.，Gonzalez P.，Rao P.V.，Zigler J.S.Jr.，FEBS Lett.322：240-244(1993))。醌氧化还原酶的序列与其它的含锌醇脱氢酶序列相关性较小，而且它缺乏锌配体残基。哺乳动物的突触囊泡膜蛋白vat-1与qor相关。该家族含有两个特征序列模板：G-H-E-x(2)-G-x(5)-[GA]-x(2)-[IVSAC]，其中的H为锌配体；[GSD]-[DEQH]-x(2)-L-x(3)-[SA](2)-G-G-x-G-x(4)-Q-x(2)-[KR]。

促皮质激素释放因子(CRF)(促肾上腺皮质激素释放素)是一种源于下丘脑的激素，它调控从脑垂体中释放促皮质激素(ACTH)。CRF与其他几种活性肽是进化相关的，它们包括：尿皮质(Ucn)，一种具有促皮质激素释放因子活性的脑哺乳动物肽；硬骨鱼紧张肽1。与CRF以及Ucn相似，它在ACTH分泌中起作用；蛙皮降压肽，它具有引发利尿效应的有效的降压作用(Vaughan J.，Donaldson C.，Bittencourt J.，Perrin M.H.，Lewis K.，Sutton S.，Chan R.，Turnbull A.V.，Lovejoy D.，RivierC.，Rivier J.，Sawchenko P.E.，Vale W.，Nature 378：287-292(1995))这些激素是约含有40个氨基酸残基的肽链，它们的C端酰胺化，并由一个较大的前体蛋白加工而来。该家族成员具有一个特征序列模板：[PQA-]]x-[LIVM]-S-[LIVM]-x(2)-[PST]-[LIVMF]-x-[LIVM]-L-R-x(2)-[LIVMW]。人促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)存在于脑部以及外周神经末端，刺激ACTH从垂体细胞中释放，并可降低血压(Ling etal.，BBRC，Vol.122，pp.1218-1224(1984))。

本发明新的多肽具有含锌的醇脱氢酶家族以及促皮质激素释放因子蛋白家族成员的特征序列模板，且具有相似的生物学功能，在结构及功能上有高度同源性与相似性，故而被认为是含锌的醇脱氢酶以及促皮质激素释放因子蛋白家族的新成员。该多肽及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可用于诊断兼防治与紧张相关的疾病，例如紧张引起的压抑，焦虑，头痛，过敏性肠综合征，炎症疾病，胃肠疾病，食欲缺乏，出血性紧张，停止服用药物以及酒精综合征，吸毒以及生育疾病，并可减缓脑部以及肌肉系统损伤的水肿程度，治疗内毒素休克等疾病或是作为乙醇代谢的抑制剂。

由于如上所述含锌的醇脱氢酶以及促皮质激素释放因子蛋白10.01蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的含锌的醇脱氢酶以及促皮质激素释放因子蛋白10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新含锌的醇脱氢酶以及促皮质激素释放因子蛋白10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。