[发明专利]一种新的多肽——人mPer3－10.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人mPer3-10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

大多数生物体都有自己各种各样的行为和生理的周期性，这个周期性通常称为生物体的生物周期，接近24小时。生物周期的普遍性和生物突变回复性表明有一个古老的，由基因决定的机制在起作用。动物中第一个被发现并研究得最清楚的始终基因是Drosophila period(dPer)基因。近来，它的一系列相似基因也从老鼠和人类身上分离出来[Albrecht，U.，Sun，Z.S.，Eichele，G.and Lee，C.C.(1997)Cell，91.1055-1064][Takumi，T.et al.(1998)Genes Cells，3，167-176]。第一个被发现的相似基因是mPer1，是老鼠的周期基因，该基因在交叉上核(SCN)中呈节律性表达，SCN是哺乳动物昼夜节律性起搏的功能中心。mPer1的表达亦受到光线以行为节奏阶段性替换方式的强烈调节。第二个被发现的相似基因mPer2表明哺乳动物的周期基因组成了一个家族。在SCN中，mPer2的mRNA含量异常高，象mPer1一样，在这种组织中呈节律性表达。这些表明周期基因家族在SCN的节律性和导引中起着重要作用[Tei，H.，Okamura，H.，Shigeyoshi，Y.，Fuk uha r a，C.，Ozawa，R.，Hirose，M.andSakake，Y.(1997)Nature，389，512-516]。现在发现第三个哺乳动物周期基因，mPer3，它受光线的调节以及表达方式本质上不同于mPer1和mPer2[ToruTakumi，Kouji Taguchi et al.，(1998)EMBO J.17(16)，4753-4759]。

mPer3蛋白的N末端并没有mPer1和mPer2所共有的典型转角-环-转角(b HLH)基元或HLH基元。PAS结构域(126-324氨基酸残基)，包括PAS-A(123-175氨基酸残基)和PAS-B(263-312氨基酸残基)重复子，它们是PER二聚体结构域[Huang，Z.J.，Edery，I.and Rosbash，M.(1993)Nature，364，259-262]以及dPER异二聚体的反应结构域[Huang，Z.J.，Curtin，K.D.and Rosbash，M.(1995)Science，267，1169-1172]，PAS结构域是三种周期基因蛋白高度保守的结构域。mPer3蛋白细胞质定位结构域CLD(330-389氨基酸残基)以及下游序列元素也是高度保守的。一个单独的核定位信号(NLS)位点位于mPer3的726-734(RQKHKRKKL)。

mPer3mRNA有两种，6.5和9.5kb，表达于心脏，大脑，肺，肝脏，肾脏和精巢，但是不在脾和骨骼肌中表达。mPer3在组织中的分布类似于mPer2，而mPer1的转录表达于各种不同的组织。mPer3蛋白表达得最多的区域是包括SCN的间脑区域，终板血管器(OVLT)，腹侧丘脑核(VMH)和弓型核(Arc)，脑回和中央杏仁状核。

在哺乳动物周期基因家族中，mPer3是第一个不依赖于光线的基因。mPer3在下丘脑区域的高表达是非常重要的，因为这个区域被认为是哺乳动物激素调节和自我调节的区域。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人mPer3的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人mPer3-10.01。

由于如上所述人mPer3-10.01蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人mPer3-10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人mPer3-10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人mPer3-10.01以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人mPer3-10.01的多核苷酸的重组载体。