[发明专利]一种新的多肽——人RNA聚合酶Ⅲ亚单位10.34和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人RNA聚合酶III亚单位10.34，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

RNA聚合酶是复杂的转录机构的核心部分，与RNA基因的转录和复制有密切关系。与DNA聚合酶不同的是RNA聚合酶能起始一条新链的合成，起始的核苷酸一般是嘌呤核苷三磷酸，而且将在RNA链的5’末端保持这一磷酸基团。

大肠杆菌的RNA聚合酶由五个亚基所组成，即α₂ββ’δ。这四种亚基的分子量分别为36.5KDa、150KDa、160KDa、16KDa，整个酶分子的分子量为465Kda，是目前已知的最大的酶之一。真核细胞中有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶I、RNA聚合酶II、RNA聚合酶III。真核生物RNA聚合酶I存在于核仁中，其功能是合成5.8SrRNA、18SrRNA、和28SrRNA；RNA聚合酶II存在于核质中，其功能是合成mRNA以及snRNA，mRNA是由聚合酶II和许多控制转录起始、延伸和终止选择性和效率的蛋白辅助因子所组成的转录复合物来合成的；RNA聚合酶III也存在于核质中，其功能是合成tRNA和5SrRNA以及转录Alu序列。三种RNA聚合酶的分子量都在500KDa左右，每种酶分子含有两个大亚基和4个-8个小亚基，每个小亚基的分子量为21.45kDa-90KDa。

人的RNA聚合酶III由16个亚单位组成，其中一些亚单位在子宫颈癌细胞株种被修饰。这些亚单位结合在一起构成了具有功能的RNA聚合酶分子，在生物体内参与调控多种相关的RNA基因的转录与表达。但各亚单位在体内的具体功能还有待于进一步的研究。

1997年，Wang等人又从人中克隆得到了三个RNA聚合酶III组成亚单位，并对着三个蛋白的结构及功能进行了研究。这三个亚单位与酵母的三个RNA聚合酶组成亚单位同源，在细胞内通过与特异的转录起始因子结合，以调控相应的RNA基因的转录与表达。该蛋白的突变或表达异常，将导致细胞内相关RNA基因的转录异常，进而引发各种相关的疾病[Wang Z，Roeder R.G.et al.，1997，GenesDev，11(10)：1315-1326]。

由上可知，RNA聚合酶III亚单位在生物体内通过与特异的转录起始因子的结合来调控体内相关基因的转录与表达。其突变或表达异常将导致相关组织的发育及生长异常，进而引发各种相关的疾病。其在体内通常与相关组织的肿瘤及癌症、胚胎发育紊乱症、生长发育障碍性疾病、炎症及免疫性疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人RNA聚合酶III亚单位的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人RNA聚合酶III亚单位10.34。

由于如上所述人RNA聚合酶III亚单位10.34蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人RNA聚合酶III亚单位10.34蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人RNA聚合酶III亚单位10.34蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人RNA聚合酶III亚单位10.34以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人RNA聚合酶III亚单位10.34的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人RNA聚合酶III亚单位10.34的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人RNA聚合酶III亚单位10.34的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人RNA聚合酶III亚单位10.34的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人RNA聚合酶III亚单位10.34的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人RNA聚合酶III亚单位10.34异常相关的疾病的方法。