[发明专利]一种新的多肽——人线粒体DNA聚合酶29.7和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人线粒体DNA聚合酶29.7，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

单个细胞线粒体包含大量的DNA分子，它们的分子量从酵母单倍体中的50到人脑或心脏组织中的几千。线粒体DNA(mtDNA)分子的大小和碱基组成以及DNA分子中的基因组成依照组织的不同改变非常大。然而线粒体DNA聚合酶之间却有许多共同的生化特征，这些特征包括催化亚基的大小、拷贝同源核糖核酸多聚体的能力、3’→5’的核酸外切酶活性，对乙基马来酰亚胺和双脱氧核苷的极度敏感性以及对蚜栖菌素的抵抗性[Gray，H.andWong，T.W.(1992)J.Biol.Chem.267，5835-5841]。

MIP1核基因编码酵母线粒体DNA聚合酶(Miplp)，该聚合酶属于原核生物DNA聚合酶家族A，该家族模型是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段[Braithwaite，D.K.and Ito，J.(1993).Nucleic Acids Res.21，787-802]。

最近生物学家又发现了新的人线粒体DNA聚合酶，该酶与Miplp在氨基酸水平上有43％的相同性。

进一步研究表明线粒体DNA聚合酶从酵母到人具有非常高度的保守性。它们有一致的线型结构，只不过人的N末端连接3’→5’外切酶和聚合酶之间的区域比酵母的大。人线粒体DNA聚合酶与DNA聚合酶家族A之间的联系非常松散，它们的同源性仅仅只限于外切酶和聚合酶结构域之间催化区域中的几个氨基酸残基。与DNA聚合酶家族A相反，人线粒体DNA聚合酶在生化特征和系统发生上与其他的DNA聚合酶家族关系更紧密，但却又完全不同于它们，属于一个新的家族[NicolasLecrenier，Pierre Van Der Bruggen，Francoise Foury.(1997).Gene185(1)，147-152]。

人线粒体DNA聚合酶除了上述与其他DNA聚合酶的共性以外，它还具有一些独特的特征。在人线粒体DNA聚合酶N末端区域有一个CAG三元重复子编码聚谷氨酸分支，位于可能的线粒体靶信号的下游部分。几种神经变性疾病包括亨特氏综合症、脊髓小脑运动失调类型I，脊髓延髓性肌肉萎缩以及Macchado Joseph综合症都与这些聚谷氨酸分支有关。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人线粒体DNA聚合酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人线粒体DNA聚合酶29.7。

由于如上所述人线粒体DNA聚合酶29.7蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人线粒体DNA聚合酶29.7蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人线粒体DNA聚合酶29.7蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人线粒体DNA聚合酶29.7以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体DNA聚合酶29.7的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体DNA聚合酶29.7的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人线粒体DNA聚合酶29.7的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人线粒体DNA聚合酶29.7的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人线粒体DNA聚合酶29.7的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人线粒体DNA聚合酶29.7异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；