[发明专利]一种新的多肽——氢化酶11.66和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——氢化酶11.66，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

氢化酶催化氢原子的可逆的氧化反应。反应式为：。氢化酶在微生物和真核生物中广泛存在，在许多涉及氢被氧化或还原的生物过程中都起重要作用。许多厌氧生物利用H₂作为能量来源，氢化酶把H₂的氧化与电子受体(例如CO₂、硫酸盐、硝酸盐、延胡索酸等)耦联起来。在酵解过程中产生的多余的电子被氢化酶转移到H⁺上形成H₂。

氢化酶可以分为两类，一类含镍，有时还会含硒([NiFe]与[NiFeSe]氢化酶)。另一类则不含镍([Fe]氢化酶)。

[NiFe]与[NiFeSe]氢化酶包含两个亚基：一个小的亚基包含信号肽序列，另一个是大的亚基。所有的大亚基在进化上都是相关的。它们包含两个Cys-x-x-Cys结构域，一个在N端，另一个在C端。这4个半胱氨酸是与镍结合的位点。在[NiFeSe]氢化酶中C端结构域的第一个半胱氨酸是硒代半胱氨酸，是镍的配基。

在产碱杆菌中有一种NAD-还原胞质氢化酶(hoxS)。这种酶包含4个亚基。其中两个(α和δ亚基)负责催化，在进化上与膜结合的氢化酶相关。

氢化酶的特征保守区域是：R-G-[LIVMF]-E-x(15)-[QESM]-R-x-C-G-[LIVM]-C其中两个C是镍结合位点。[FY]-D-P-C-[LIM]-[ASG]-C-x(2，3)-H

其中两个C是镍结合位点。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与氢化酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为氢化酶11.66。

由于如上所述氢化酶11.66蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的氢化酶11.66蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新氢化酶11.66蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——氢化酶11.66以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码氢化酶11.66的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码氢化酶11.66的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产氢化酶11.66的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——氢化酶11.66的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——氢化酶11.66的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。    

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与氢化酶11.66异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中205-525位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-886位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。