[发明专利]一种新的多肽——人GalNAc－T9.02和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人GalNAc-T9.02，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

糖是一种重要的生物化合物。糖类是细胞结构的一种组成成分，调节粘稠度，储存能量，也是细胞表面的组成成分。几乎所有的位点专一性的细胞内反应都涉及细胞表面糖类。例如，精卵结合时精子和卵子都需要细胞表面的糖类介导。有些糖蛋白是与肿瘤相关的抗体，现在已经被用来检测许多种肿瘤的存在。甚至游离的寡糖也能起到生物学作用。寡糖对与之结合的蛋白或脂类也会产生影响[Rademacher et al.，Ann.Rev.，Biochem.，(1998)，57：785]。对蛋白来说，寡糖与之结合会影响其稳定性、蛋白水解速率、从血液中清除的速率、热稳定性和溶解度。细胞表面糖类的寡糖部分的改变可能会引起癌变。在细胞分化时也发现某些种类的寡糖的改变[Toone et al.，Tetrahedron Report(1989)45(17)：5365-5422]。

糖蛋白常有O-连接的寡糖，这是寡糖共价连接到蛋白质的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基侧链上的OH基团。涉及O连接的寡糖糖基化作用全部或主要的发生在高尔基体内，N-乙酰半乳糖胺从UDP-N-乙酰半乳糖胺转移到丝氨酸或苏氨酸上。催化此反应的酶是N-乙酰半乳糖胺转移酶家族。现在已经克隆并鉴定了四种人N-乙酰半乳糖胺转移酶，分别是GalNAc-T1/T2/T3/T4[Homa et al.1993；Hagen et al.1993；White et al.1995]。它们催化不同的受体底物，但这些受体底物的结构是有联系的。相应的，这两种已知的糖胺转移酶的基因也有一段61个氨基酸序列的相似性为82％[White et al.1995，EMBL accession#L16621]。

现在，关于蛋白O-连接糖基化反应的了解都来自于上述的两种转移酶。但是已经发现并非所有的O-连接糖基化反应都由这两种转移酶所催化。例如，一种从HIV.sub.IIIB gp120(GRAFVTIGKIG SEQ ID NO：4)中提取的多肽是多种器官中提取出来的GalNAc-转移酶的有效的受体底物。但是纯化的GalNAc-T1/T2/T3/T4并不能催化这种多肽糖基化。这就提示了有另外的糖基转移酶的存在。

寻找新的糖基转移酶可以对更深入的了解糖基化作用提供新的线索。新的糖基转移酶还可以用来治疗由于体内糖蛋白合成失常而导致的各种免疫疾病，内分泌系统分泌失常等；新的糖基转移酶可以用于人工合成糖基化的多肽，这些多肽可以应用于药用制品或其他商业应用中。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人GalNAc-T的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人GalNAc-T9.02。

由于如上所述人GalNAc-T9.02蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人GalNAc-T9.02蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人GalNAc-T9.02蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人GalNAc-T9.02以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人GalNAc-T9.02的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人GalNAc-T9.02的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人GalNAc-T9.02的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人GalNAc-T9.02的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人GalNAc-T9.02的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人GalNAc-T9.02异常相关的疾病的方法。