[发明专利]一种新的多肽——醌蛋白还原酶17.05和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——醌蛋白还原酶17.05，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

吡咯并喹啉醌(PQQ)是一种氧化还原合酶。其在生物体内作为很多酶的协同因子，特别是作为一些细菌脱氢酶的辅因子。醌蛋白即被认为是一种含有吡咯并喹啉醌的蛋白，当然，其还可能含有其他不同的醌蛋白辅基。对这些蛋白的结构研究发现，这些蛋白均具有显著的进化相关性，它们在蛋白结构上高度同源。

早在三十年前，人们就发现在细菌的甲醇及葡萄糖脱氢酶中存在一种新的辅基，该辅基与吡咯并喹啉醌有较高的同源性。细菌甲醇脱氢酶的活性位点通常与一钙离子结合以维持酶的正常活性构型，并调节该酶在生物体内的功能[Anthony C.，Ghosh M.，1998，Prog Biophys Mol Biol，69：1-21]。另外，研究发现，脱氢酶作用过程中的吡咯并喹啉醌对于生物体内一些营养状态的维持也起着十分重要的作用。其在不同生物的各种组织中维持着维生素的水平。哺乳动物体内的吡咯并喹啉醌还原酶还在生物体内参与各种抗氧化歧化的过程。由上可知，吡咯并喹啉醌作为一种脱氢酶的辅酶在生物体内参与各种不同的生理过程，含有该酶辅助因子的蛋白的表达异常与生物体各种营养缺陷症、各种与氧化歧化相关的疾病的发生密切相关[Christensen H.N.，1994，Nutr.Rev.，52：24-5]。

如上所述的各种脱氢酶均由600-800个氨基酸残基组成。在其高度保守的序列区域含有两个一致性序列片段，第一个位于氨基酸序列N末端；而第二个序列位于氨基酸序列的C末端。这两个一致性序列片段如下所示：序列片段1：[DEN]-W-X(3)-G-[RK]-X(6)-[FYW]-S-X(4)-[LIVM]-N-X(2)

-N-V-X(2)-L-[RK]；序列片段2：W-X(4)-Y-D-X(3)-[DN]-[LIVMFY](4)-X(2)-G-X(2)-[STA]-P；所有的醌蛋白脱氢酶均含有这两个一致性序列片段，这两个序列片段是脱氢酶作用的活性位点，这两个序列片段的突变将直接导致酶在生物体内的表达，从而影响酶在体内的活性及作用。该酶在体内通常与一些营养缺陷症及各种氧化歧化相关的疾病的发生相关。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与醌蛋白还原酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为醌蛋白还原酶17.05。

由于如上所述醌蛋白还原酶17.05蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的醌蛋白还原酶17.05蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新醌蛋白还原酶17.05蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——醌蛋白还原酶17.05以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码醌蛋白还原酶17.05的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码醌蛋白还原酶17.05的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产醌蛋白还原酶17.05的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——醌蛋白还原酶17.05的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——醌蛋白还原酶17.05的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与醌蛋白还原酶17.05异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。