[发明专利]一种新的多肽——髓磷脂P0蛋白12.87和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——髓磷脂P0蛋白12.87，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

髓磷脂P0蛋白motif，细胞外区域约125个残基，形成V型免疫球蛋白区域：横胯膜区域：细胞质C-末端区域，包括一些带有正电荷的残基及一些丝氨酸蛋白激酶的作用底物。

髓磷脂P0蛋白motif共有序列1图式：S-[KR]-S-x-K-[AG]-x-[SA]-E-K-K-[STA]-K

从SWISS-PROT蛋白库中分析具有该MOTIF的蛋白全都有此序列，无假阴性和假阳性特征。

P0蛋白是外周神经系统(PNS)髓磷脂的一种主要的结构糖蛋白，占髓磷脂蛋白总量的50％以上，在髓磷脂结构的形成和保持方面起着重要的作用。

P0蛋白的分子量约28KD，由219个氨基酸残基组成三个不同的功能区域：N端(残基1-124)，胯膜区(125-150)，以及C端(151-219)。氨基酸区域包括一条带负电荷的糖链。通过cDNA分析，发现存在信号序列，可以推断Asn-93很可能位于细胞外的膜上。可能这个区域通过疏水力与静电力的相互作用形成髓磷脂IPL(intraperiod line)。另一方面，在细胞质部分的碱性C端区域与碱性蛋白一起通过与膜的静电作用力形成MDL(major dense line)。P0蛋白的125-150区域是高疏水性的，表明这个区域是胯膜段。P0蛋白的二级结构包括7个螺旋区域，11个β-折叠区域以及8个转角结构。氨基酸区域主要是β-折叠，而羧基端主要是螺旋。7个β-折叠结构：A、B、C、D、E、F、G，与所有的免疫球蛋白相似，由2个β-片层组成，而β-片层是由逆平行的β链组成。在P0蛋白中存在一个特殊的β-折叠C’，表明P0蛋白与免疫球蛋白的V区域的同源性要大于C区域。β-折叠上的Cys可能与β-折叠F上的Cys结合形成二硫键。除了二级结构上的相似，可以证明P0蛋白的氨基端序列与免疫球蛋白分子的V区域的重要残基同源。

MPZ(Myelin P0)基因的功能区域长约7KB，由六个外显子组成。所有的外显子-内含子接点序列都遵循GT/AG规则。基因的5’端区域具有TA富集单元(类似TATA框)，两个CAAT框以及一个单独的由引物扩展法检测到的转录启动位点。人MPZ基因位于染色体lq22-lq23。

P0蛋白在髓磷脂结构的形成中起粘合分子的作用。这种糖蛋白是周围髓磷脂的主要粘合成分，作为Schwann细胞原生质膜自身粘合的媒介。虽然P0的自然分泌量在Schwann细胞中是受到限制的，但是P0媒介粘合的分子机制是普遍且必须的。因为在不同的细胞系中分泌时，P0引起强烈的细胞间的粘连。P0蛋白还可以促进轴突的生长。

P0蛋白属于免疫球蛋白超家族。该家族包括NCAM，MAG，L1等。由于P0蛋白包括单个免疫球蛋白区域，它是超家族中最简单的分子，因此P0蛋白被假设为免疫球蛋白超家族的原始形式。

MPZ基因的突变位于1号染色体上，与夏-马-图三氏症(Charcot-Marie-Tooth进行性神经性腓骨肌萎缩)染色体显性方式有关。该病的症状是表现出Schwann细胞的神经传导速度减慢和过度生长肥大。CMT1(Charcot-Marie-Tooth Type 1)神经病表现为神经传导的减慢。CMT1a(Charcot-Marie-Tooth Type 1a)是由于周围髓磷脂蛋白位于17号染色体上的22号基因的复制及偶然的点突变，大大降低了神经传导速度。实验证明突变发生在Lys96-to-Glu及Asp90-to-Glu，这两个突变都发生在细胞外，在与髓磷脂膜结合的过程中起重要作用。CMT1b(Charcot-Marie-Tooth Type 1b)是由于2号外显子上3个bp的缺失导致Ser34密码子的缺失。这个残基位于细胞外。

本发明多肽被推断鉴定为一种新的人髓磷脂P0蛋白，它在髓磷脂结构的形成中起粘合分子的作用，并与神经传导的速度及生长速度有关。此外该基因对于研究免疫球蛋白超家族成员的作用机制及相互影响也很有帮助。该基因还可用于研制治疗进行性神经性腓骨肌萎缩症的药物。利用本发明的多肽可以研究抑制或促进神经传导的速度及生长速度的调控。