[发明专利]一种新的多肽——含有KRAB区域的锌指蛋白27.83和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——含有KRAB区域的锌指蛋白27.83，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核转录因子是一类在真核基因转录过程中起调节作用的蛋白质，它们在体内参与决定基因在何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常进行转录和表达。转录因子对基因表达的调控主要通过与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用完成。对哺乳动物中的多种转录因子进行研究发现，各种转录因子中均含有80-100个左右氨基酸残基组成的长度不等的DNA结合结构域。DNA结合结构域大体上有四种花式结构：α螺旋-转角-α螺旋，Cys-His锌指，Cys-Cys锌指，Leu-拉链。花式结构对于维持整个结构域的结构及转录因子发挥正常的生物学功能都是十分重要的。

KRAB锌指蛋白(KRAB-ZFPs，Krppel-associated box zinc-finger protein)是一个大的亚家族，包含许多Krüppel C2H2类型的ZFPs。KRAB是生物进化过程中的一个保守结构域。真核DNA结合蛋白中有许多相当普通的保守结构域，其中只有少数与DNA结合功能有关。KRAB与DNA结合有关，它的N端具有指重复。这种C2H2型锌指结构域被发现存在于一些具有关键发育调节功能蛋白中。果蝇Krüppel与胚胎模式形成有关，鼠Krox-20锌指蛋白与后脑形成有关，它还可控制细胞增生扩散。

人体内有300-700个不同的ZFPs，它们都具有典型的Krüppel特征，在重复的指之间有保守的6氨基酸草图(H/C link)。KRAB-ZFP基因中，两个分开的外显子编码KRAB，锌指由一个单独的外显子编码。KRAB-ZFP基因在人体内广泛表达，在T淋巴细胞中的表达水平高得多。ZFPs被认为与肿瘤发生有关，如Gli-3在Greig综合症中复制(Eric J.Bellefroid，et.al，The EMBO Journal，12(4)，1363-1374，1993；Eric J.Bellefroid，et.al，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88(9)，3608-3612，1991)。

ZNF-37是含有12个串连重复的锌指基元和一个KRAB区域组成的转录因子。KRAB区域是一个转录抑制子，位于氨基末端。而锌指重复位于羧基末端。ZFP-37位于人染色体9q32上。序列比较显示，人的ZFP-37同鼠的ZFP-37有同源性。ZFP-37在染色体上的位置和它的表达形式表明，它同颅面-肢的畸形——Nager综合病症有关(Mamm，Gemome 9(6)，458-462，1998)。

本发明的人的基因与人KRAB锌指蛋白基因ZNF-37在蛋白水平上有58％和74％的相同性和相似性。且两者均含有KRAB锌指蛋白亚家族的特征性结构域——指重复和H/C link。基于以上各点，故认为本发明的新基因为KRAB-ZFP基因，命名为{含有KRAB区域的锌指蛋白27.83}。

由于如上所述含有KRAB区域的锌指蛋白27.83蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的含有KRAB区域的锌指蛋白27.83蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新含有KRAB区域的锌指蛋白27.83蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——含有KRAB区域的锌指蛋白27.83以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有KRAB区域的锌指蛋白27.83的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有KRAB区域的锌指蛋白27.83的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产含有KRAB区域的锌指蛋白27.83的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——含有KRAB区域的锌指蛋白27.83的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——含有KRAB区域的锌指蛋白27.83的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。