[发明专利]一种新的多肽——人磷酸酶32.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人磷酸酶32.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

磷酸甘油脂(简称磷脂)种类繁多，体内周转更新快，是细胞膜、细胞器膜的主要组成部分。磷脂组成的变化对细胞膜流动性，膜蛋白的活性等细胞生理功能有重要的调节作用。磷脂在生物体内，经水解为甘油、脂肪酸、磷酸和各种氨基醇等。

磷脂酶分为四类，即磷脂酶A₁，A₂，C和D，它们分别作用于磷脂不同的脂键。其中磷脂酶A1专一地水解磷脂分子内C1位的脂肪酸，磷脂酶A₂专一地水解磷脂分子C₂位脂肪酸，而磷脂酶C和D则对磷酸双脂键的水解起作用。

磷脂酶A1，A2和C虽然有其催化底物的特异性，但在体内更可能是协同作用的，甚至在功能上可能在一定条件下存在互补的作用。在体外实验中PLA1与PLA2可以在一定条件下交换彼此的底物。在体内，PLA1、PLA2和PLC也经常被发现形成一条磷脂水解反应系统链而存在。

最近的研究已经克隆了一种编码人的磷脂酶PLA2的mRNA，对人的磷脂酶PLA2的结构也有了一定的了解，编码这种人的磷脂酶PLA2的基因被定位于人染色体22q13.1，Northern杂交的结果表明，人的磷脂酶PLA2的mRNA在各种人组织中均有表达，特别是在心脏、脑、骨骼肌、前列腺、脊髓、甲状腺等组织中显著表达，研究证明在不同组织中人的磷脂酶PLA2至少有4种不同的转录调节因子，因此人的磷脂酶PLA2在不同的转录调节因子存在时，会导致人的磷脂酶PLA2不同的表达和细胞定位。(Eur J Biochem 1999 Jun；262(2)：575-85)

对结构的深入研究发现，人的磷脂酶PLA2有C末端的脂肪酶结构域(GXSXG)，也有N末端重复的锚蛋白序列。N末端重复的锚蛋白序列与蛋白和蛋白之间的相互作用有关。(J Biol Chem 1998 Jan 2；273(1)：207-14)

磷脂酰胆碱(PtdCho)是哺乳动物细胞膜中最重要的一种磷脂，它可以调节细胞的生存和发育能力，而磷脂酶PLA2可以调控PtdCho在细胞中的水平。(BiochimBiophys Acta 1999 Jul 9；1439(1)：77-88)

研究发现，在缺血性细胞损伤中，膜的磷酸脂化是由于磷脂酶PLA2的活性提高，磷脂酶PLA2可以用于治疗急性缺血性肾脏疾病。(Curr Opin NephrolHypertens 1999 Jul；8(4)：473-7)

研究证明，人的磷脂酶PLA2对精神分裂症也有一定的作用。(Arch GenPsychiatry.1998 Aug；55(8)：752-3)

很多磷脂酶A2(PLA2)是从蛇、蜥蜴、蜜蜂和哺乳动物中获得的。作为一种突触前的神经毒素，毒蛇的PLA2能够阻断乙酰胆碱从神经末端的释放从而抑制神经肌肉的传导。人类PLA2在磷脂的消化及代谢以及炎症反应前体合成等重要细胞过程中起作用。临床研究证明血浆与关节润滑液中PLA2的水平增高与关节炎发病强度表现出正相关，而一些细胞内毒素与免疫调节因子对PLA2的作用有关键性影响。研究还表明PLA2的拮抗性蛋白对与包括关节炎、过敏性炎症、皮肤炎、眼炎以及胶原炎等疾病的治疗有效，并能同时避免由化合物治疗炎症引起的种种副作用。

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽被推断鉴定为一种新的人磷脂酶79(HPLA2-79)，其人磷酸酶为人不依赖于钙离子的磷脂酶A2，蛋白号是AC005058。

由于如上所述人磷酸酶32.01蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人磷酸酶32.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人磷酸酶32.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人磷酸酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人磷酸酶32.01。