[发明专利]一种新的多肽——含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47和编码这种多肽的多核甘酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

核苷二磷酸激酶(NDK)(Parks R.，Agarwal R.(In)The Enzymes(3rd edition)8：307-334(1973)催化核苷5′二磷酸向相应的三磷酸的转化。它是除了ATP的合成以外，其它的核苷三磷酸(NTP)的合成所需要的一种酶。它们提供NTP中核酸的合成，CTP中脂质的合成，UTP中多糖的合成，GTP中蛋白质的延长信号的转导，和微管的聚合。

在真核生物中，它们是NDK同工酶的一个小的家族，在不同的亚细胞区起作用，有着不同的功能。通过SDS-PAGE的分析，人，小鼠和微管相联系的NDPK有两个蛋白质链(A和B)，它们都是有152个氨基酸组成，分子量分别为17143和17294。实验表明，碱性同工酶在B型多肽中较多，而酸性同工酶在A型多肽中较多。真核生物的NDK同工酶是两个高度相关的A和B链的六聚体(Gilles A.-M.，J.Biol.Chem.266：8784-8789，1991)。通过随机的连接(A6，A5B...AB5，B6)，这两种链形成具有不同的等电点的同工酶。

NDK是一个17Kd的蛋白质，它通过来自ATP的末端磷酸基团的转移，通过一个乒乓机制(其中组氨酸残基被磷酸化)而起作用。在镁存在的情况下，磷酸酶可以转移它的磷酸基团到任何一个NDP，而产生一个NTP。

我们已经测序了真核和原核生物的NDK同工酶。实验表明，果蝇的awd(非正常的翅圆盘)蛋白是一个同微管相关的NDK(Biggs J.，Cell 63：933-940(1990)，哺乳动物的NDK就是已知的转移抑制因子nm23。

NDK的序列在进化中是高度保守的。在所有已知的NDK同工酶中，有一个保守的单链组氨酸残基，它涉及它的催化机制。我们发现的特征形式含有如下的残基：N-x(2)-H-[GA]-S-D-[GSA]-[LIVMPKNE][H是推测的活性位点残基]。在真核生物的NDK激酶的磷酸化位点是His-118，它在所有的NDK中都是保守的。

NDK同依赖GTP的蛋白(如微管蛋白，延长因子1和膜G蛋白)在腺苷环化酶的功能相联系，表明，NDK引导高能量的磷酸根从ATP到其它的蛋白质，和参与更多复杂的细胞功能。

本发明的多肽的蛋白序列包含核苷二磷酸激酶活性位点特征性保守序列，因此认为是一种新的核苷二磷酸激酶，如果其发生突变或表达异常，将影响细胞的代谢过程，生长分化和发育，神经递质的合成和释放，最终会产生肿瘤。故命名为含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47。

由于如上所述含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与含有核苷二磷酸激酶活性位点特征的蛋白19.47异常相关的疾病的方法。